Key information

Title: Fôrsammensetning for fisk for anvendelse i å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom
Application number: 20120594
Case type: PCT-based
Status: 17.06.2019 P.g.a. manglende svar. Søker har ikke begjært gjenopptakelse
Filed: 22.05.2012
Divided from: 20120303 (347704)
Priority: 14.09.2009 NO 20093000
International application date: 14.09.2010
International application number: PCT/NO2010/000336
Effective date: 14.09.2010
Publicly available: 21.05.2012
Applicant: Aker Biomarine ASA (NO) et al.
Inventor: Sigve Nordrum (NO) et al.
Agent: ACAPO AS (NO)

Abstract and drawing

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content.

Det beskrives en forsammensetning som er egnet for å fore fisk for å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom (HSMB) i fisk.

Publications

Checking availability of the latest published version...

Documents

Expand

Download files (28)

Date

Date	Doc. No.	Process	Case number	In/Out	Journal description	To/from
30.10.2019	15-01	Saksbehandling	20120594	UT	Endelig Henleggelse	ACAPO AS
23.07.2019	14-01	Saksbehandling	20120594	UT	Henlagt manglede svar	ACAPO AS
16.04.2019	13-01	Saksbehandling	20120594	INN	Korrespondanse (Hovedbrev inn)	ACAPO AS
17.01.2019	12-01	Saksbehandling	20120594	UT	Realitet patent	ACAPO AS
11.07.2018	11-06	Saksbehandling	20120594	INN	Krav merket	ACAPO AS
11.07.2018	11-05	Saksbehandling	20120594	INN	Krav	ACAPO AS
11.07.2018	11-04	Saksbehandling	20120594	INN	Martinez et al 2013 PUFA	ACAPO AS
11.07.2018	11-03	Saksbehandling	20120594	INN	Hovedbrev	ACAPO AS
11.07.2018	11-02	Saksbehandling	20120594	INN	Povey et al. 2009 J Anim Ecol	ACAPO AS
11.07.2018	11-01	Saksbehandling	20120594	INN	Korrespondanse (Hovedbrev inn)	ACAPO AS
21.06.2018	10-01	Saksbehandling	20120594	INN	Korrespondanse (Hovedbrev inn)	ACAPO AS
21.12.2017	09-02	Saksbehandling	20120594	UT	PT report 02:39:58
21.12.2017	09-01	Saksbehandling	20120594	UT	Realitet patent	Acapo AS
12.08.2013	07-04	Saksbehandling	20120594	INN	Krav ren	Acapo AS
12.08.2013	07-03	Saksbehandling	20120594	INN	Krav merket	Acapo AS
12.08.2013	07-02	Saksbehandling	20120594	INN	Hovedbrev	Acapo AS
12.08.2013	07-01	Saksbehandling	20120594	INN	Korrespondanse (hoved dok)	Acapo AS
10.05.2013	06-01	Saksbehandling	20120594	UT	Deling	Acapo AS
25.06.2012	05-02	Saksbehandling	20120594	INN	Hovedbrev	Acapo AS
25.06.2012	05-01	Saksbehandling	20120594	INN	Korrespondanse (hoved dok)	Acapo AS
13.06.2012	04-01	Saksbehandling	20120594	UT	Patent - Reminder of first annual fee (2012.06.13)
31.05.2012	03-03	Saksbehandling	20120594	INN	Krav	Acapo AS
31.05.2012	03-02	Saksbehandling	20120594	INN	Hovedbrev	Acapo AS
31.05.2012	03-01	Saksbehandling	20120594	INN	Korrespondanse (hoved dok)	Acapo AS
25.05.2012	02-01	Saksbehandling	20120594	UT	PT PFC Defect Letter	Acapo AS
22.05.2012	01-03	Saksbehandling	20120594	INN	P12061NO02 Figurer 1-9	Acapo AS
22.05.2012	01-02	Saksbehandling	20120594	INN	Beskrivelse	Acapo AS
22.05.2012	01-01	Saksbehandling	20120594	INN	National Patent Application Form	Acapo AS

Description, claims and drawings

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content.

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en forsammensetning for fisk omfattende konvensjonelle foringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, en anvendelse av forsammensetningen og en fremgangsmåte for å fore fisk som er mottagelige for en hjerte og skjelettmuskelbetennelsesinfeksjon.

Hjerte og skjelettmuskelbetennelsessykdom (HSMB) er en alvorlig smittsom sykdom i atlantisk laks med et høyt potensiale for overføring fra infiserte til frisk fisk. Siden første forekomst i 1999 har et økende antall utbrudd av sykdommen blitt registrert. Således, etter registrering av 68 utbrudd i 2003 og 54 i 2004 har antallet økt hvert år. I 2007 ble sykdommen diagnostisert ved 162 sjøvannsanlegg langs norskekysten og 144 i 2008 (Figur 1). Disse utbrudd forårsaker store tap for den norske lakseindustri siden anleggene som angripes får et stort antall fisk (mer enn 90 %) som lider av hjerteskader måneder etter sykdomshendelsen, noe som signifikant reduserer deres vekstpotensial. De fleste utbrudd rapporteres i januar, juni, juli og oktober, i fisk som er overført til sjøvann. Sykdommen har en stor økonomisk innvirkning for den norske lakseoppdrettsindustri, og et enkelt fiskeoppdrettsselskap rapporterte tap på opptil 10 millioner norske kroner per år på grunn av sykdommen 5 til 9 måneder senere. Imidlertid, der er indikasjoner på at HSMB også er relevant i andre arter enn de som tilhører salmonidene.

Kliniske tegn på HSMB er typisk redusert appetitt og avvikende svømmeatferd. Der er ingen åpenbare ytre tegn, men ved obduksjon så fremkommer hjertet som blekt, mykt og slapt. HSMB produserer betennelse i hjertet som resulterer i død av hjerte-celler. Disse skader fremkommer allerede i tidlige stadier av sykdommen og kan fortsette i flere måneder. Mortalitet øker med økende grad av hjertebetennelse. Inflammasjonen og celledød kan spres til andre organer og vev så som rød skjelettmuskel og lever, noe som forårsaker ytterligere alvorlige skader på disse organer. Den infeksiøse natur av HSMB har blitt dokumentert, idet sykdommen kan induseres i frisk fisk ved å injisere homogenisert vev fra fisk diagnostisert med HSMB, og ytterligere overføres til frisk samhabiterende fisk (Kongtorp et al., 2004. Heart and skeletal muscle inflammation in Atlantic salmon, Salmo salar L: a new infectious disease. Journal of Fish Disease: Vol 27(6), (p). 351-358). HSMB forårsakes av et virus, som har blitt isolert (Eliassen et al., 2004. Isolation of heart and skeletal muscleinflammation virus (HSMIV)from Salmon. The 6th International Symposium on Vimses of Lower Vertebrates, Poster 19). Imidlertid, siden viruset ikke har blitt fullstendig karakterisert ennå så har vaksiner mot HSMB ikke blitt utviklet til nå. I tillegg, gjeldende utfordringsmodeller av sykdommen i laboratorier reproduserer kun histopatologien som er observert i feltet, ikke mortaliteten. Således, der er et klart behov for alternative behandlinger og fremgangsmåter for å redusere de negative effekter av denne alvorlige infeksjon. Et formål med foreliggende oppfinnelse er derfor å finne nye strategier og behandlinger som kan anvendes for positivt å påvirke sykdomsutviklingen i HSMB-infisert fisk, og likeledes i fisk som er mottakelige for infeksjon.

Den foreliggende oppfinnelse vedrører i et første aspekt en forsammensetning for fisk for anvendelse i å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom, omfattende konvensjonelle foringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, kjennetegnet ved at protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i foret er høyere enn 2, fortrinnsvis høyere enn 2,7 for.

I en foretrukket utførelse er protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i foret er høyere enn 2,7.

I en foretrukket utførelse utgjør proteinet mer enn 50% (basert på vekt) av dietten, fortrinnsvis mer enn 52% og at lipidene utgjør mindre enn 20% (basert på vekt), fortrinnsvis 28% av dietten.

Det er foretrukket at mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, fortrinnsvis mer enn 23%, mer fortrinnsvis 24%.

Mer foretrukket, innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 er mer enn 7% av de totale fettsyrer, fortrinnsvis mer enn 9%, mer fortrinnsvis 10,2%.

Fortrinnsvis er sammensetningen i hovedsak som angitt for anti-HSMB diet 1 eller for anti-HSMB diet 2 i tabell 1 eller tabell 2.

Fortrinnsvis omfatter sammensetningen mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, mer fortrinnsvis er mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, og mer fortrinnsvis er mer enn 24% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.

Fortrinnsvis er innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) mer enn ca. 7% av de totale fettsyrer.

Mer foretrukket er innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) mer enn ca. 8% av de totale fettsyrer, mer fortrinnsvis 9%, mer foretrukket mer enn ca. 10%, så som ca. 10,2%.

I en utførelse er sammensetningen for laksefisk, og sammensetningen har et redusert innhold av lipider og et øket innhold av proteiner sammenlignet med kommersielle forsammensetninger anvendt for laksefisk i samme alder, størrelse og/eller utviklingstrinn.

Mer foretrukket, innholdet av n-6 fettsyrer er mindre enn 11% av de totale fettsyrer, fortrinnsvis i området 7-11%, mer foretrukket ca. 10%.

Mer foretrukket, innholdet av n-3 fettsyrer er mer enn 23% og nivået av n-6 fettsyrer er mindre enn 11 % av de totale fettsyrer.

Mer foretrukket, forholdet n-3 til n-6 fettsyrer er høyere enn 1,6, fortrinnsvis mer enn 2,2, mer foretrukket mellom 2,3 og 3,4.

I en utførelse er innholdet av tilsatt vegetabilsk olje er mindre enn 0,5%, fortrinnsvis 0,2% basert på vekten av sammensetningen, og at oljen fortrinnsvis tilsettes som et hydrolysat.

I en utførelser omfatter sammensetningen omfatter hydrolyserte fosfolipider, fortrinnsvis ca. 0,1-0,2 vekt% av dietten, mer foretrukket mer enn 0,2 vekt% av dietten.

I en utførelser omfatter sammensetning omfatter krillmel, fortrinnsvis ca. 5 vekt%, mer foretrukket mer enn 5 vekt% av dietten.

I en utførelse omfatter foret ytterligere nukleotider og/eller manna-oligosakkarider og/eller anti-inflammatoriske forbindelser så som flavonoider.

I en utførelse utgjør nevnte proteiner mer enn 50% (basert på vekt) av sammensetningen, hvor lipidene utgjøre mindre enn 20% (basert på vekt), hvor mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, og mer foretrukket utgjør proteinet mer enn 52% (basert på vekt) av sammensetningen, og hvor lipidene utgjør mindre enn 18%

(basert på vekt), fortrinnsvis 18% av dietten, hvor mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.

I et andre aspekt vedrører foreliggende oppfinnelse anvendelse av forsammensetningen som angitt over for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning og/eller ernæringssammensetning og/eller funksjonelt for for profylakse og/eller behandling av hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom.

I en foretrukket utførelse anvendes forsammensetningen for å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom i fisk.

I en utførelse er nevnte fisk er en laksefisk, flatfisk eller en annen fiskeart egnet for akvakultur, fortrinnsvis artene atlantisk laks ( Salmo salar).

I et tredje aspekt vedrører foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å hindre hjerte- og skjelettmuskelbetennelsesinfeksjon, hvor sammensetningen fores til fisken i en periode før utfordring av en infeksjon, under infeksjonen og etter at fisken har blitt infisert.

Fortrinnsvis, sammensetningen fores i en periode på minst 8 uker pre infeksjon, mer fortrinnsvis 10-16 uker, mest foretrukket 16-20 uker og 8-20 uker post infeksjon.

Det skal anerkjennes at egenskaper ifølge oppfinnelsen beskrevet i ovennevnte kan kombineres i enhver kombinasjon uten å avvike fra oppfinnelsens ramme.

Utførelser av oppfinnelsen vil nå bli beskrevet, ved hjelp av eksempler med referanser til de medfølgende figurer, hvor: Figur 2 viser modellert kumulativ sannsynlighet av myokardisk score mellom for ved 10,12, 14 og 16 uker. Grafen viser sannsynlighet for at myokardisk score er lik eller mindre enn det som avleses på x aksen. Figur 3 viser modell koeffisienten (± 95 % konfidensintervaller) av myokardisk scoremodell sammenlignet mellom foringer ved 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring. Dette betyr at dersom 95 % konfidensintervaller ikke overlapper de røde stiplete linjer som angir koeffisienten for kontrolldietten for en bestemt uke, så kan forskjellen vurderes som signifikant ved 5 % nivå. Videre, dersom forene sammenlignes over underplottene, kan uker som ikke har 95 % konfidensintervaller som krysser null linjen (ikke trukket) vurderes signifikant forskjellige fra 10 uker. Figur 4 viser modellerte kumulative sannsynligheter for epikardscore for hvert for ved 10,12, 14 og 16 uker. Figurene gir sannsynligheten for at epikardisk score er lik eller lavere enn det som avleses på x aksen. Selv om forskjellene ikke var signifikante mellom de forskjellige dietter på epikardscore, så er der en klar trend at epikardscore er forbedret ved foring med anti-HSMB1 eller 2. Figur 5 viser modellkoeffisientene (± 95 % konfidensintervaller) av den epikardiske scoremodell sammenlignbar mellom for ved 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring.

Dette betyr at dersom 95 % troverdighetsintervallet ikke overlapper den røde stiplete linje som angir koeffisienten for kontrolldietten for en bestemt uke, så kan forskjellen vurderes som signifikant ved 5 % nivå. Videre, dersom kontrollforene sammenlignes over underplott, kan uker som ikke har 95 % konfidensintervaller som krysser null linjen (ikke trukket) vurderes signifikant forskjellig fra 10 uker. Figur 6 viser de modulerte kumulative sannsynligheter for leverscore mellom foringer innen prøvetakingsukene. Grafen viser sannsynligheten for at score er lik eller mindre enn det som avleses på x aksen. Figur 7 viser modellkoeffisienter (± 95 % konfidensintervaller) av leverscore modell ved å sammenligne mellom for ved 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring. Dette betyr at dersom 95 % konfidensintervall ikke overlapper den røde stiplete linje som angir koeffisienten for kontrolldietten for en bestemt uke, så kan forskjellen vurderes signifikant ved 5 % nivå. Videre, dersom kontrollforene sammenlignes over underplottene, kan uker som ikke har 95 % konfidensintervaller som krysser null-linjen (ikke trukket) vurderes signifikant forskjellig fra 10 uker. Figur 8 viser midlet vektøkning og 95 % konfidensintervall under 8 ukers foringsperiode pre utfordring. Figur 9 viser nivået av EPA i hjertevev av atlantisk laks 8, 10, 12 g 16 uker etter utfordring.

Dietteffekten av HSMB ble testet i et foringseksperiment med infisert atlantisk laks (Salmo salar). Laksesmolt anvendt for eksperimenter var alle foret med den samme kommersielle diett i en periode på 10 uker under akklimatiseringsperioden. All fisken var i god tilstand og viste god og hurtig tilpasning til sjøvann.

Forsøket besto av to faser. Under den første del ble det utført en 8 ukers periode pre utfordring, som ble utført ved en foringsforsøksfasilitet. Etter denne periode ble fisken overført til en sykdomsutfordringsfasilitet og fisken ble akklimatisert i 2 uker. Etter denne periode omfattet den andre del av studiet en utfordring, foring postutfordring og varte i 16 uker (det vil si 16 uker postutfordring).

Totalt 945 atlantiske laks Salmo salar, pit-merket, med en gjennomsnittlig utgangs-vekst på 10 g, sjøvannstilpasset ble fordelt i 9 tanker (1,0 x 1,0 m, 50 cm dybde; 500 liter volum) ved foringsforsøksfasiliteten. Tre dietter ble vilkårlig allokert blant de 9 tanker (3 tanker per diett) og foret til fisken i en periode på 8 uker. Mengden for som ble tilbudt under 8 ukers perioden var basert på målt eller estimert biomasse i tankene. Det daglige foringsforhold som ble tilbudt varierte mellom 0,8-1,1 % fiskekroppsvekt per dag. Forsøksforene som ble gitt ble justert gjennom forsøket for å komplisere for fiskevekst. Fisken ble holdt i sjøvann ved omgivende temperatur og saltholdighet og diurnal fotoperiode, 24:0 (lys (L): mørk (D)). Vanntemperatur og saltholdighet ble målt hver dag i en representativ tank.

Etter 8 ukers perioden ble fisken veid og lengdemålt, pit-merke ble registrert og overført til sykdomsutfordringsfasiliteten. Straks den nådde utfordringsfasiliteten ble fisken allokert til 18 tanker (2 laboratorier x 9 tanker, det vil si 6 tanker per diett) hvor den samme dietthistorie som under tidligere 8 uker ble beholdt. Fisken fikk akkli-matisere seg til tankene ved utfordringsfasiliteten i 2 uker og deretter utfordret med HSMB. Fisken ble anestetisert før utfordring til HSMB-virus. HSMB-virus ble isolert fra syk fisk under et klinisk utbrudd av HSMB. All fisk ble utfordret med intra-muskulær injeksjon (0,1 ml på hver side nær den laterale linje) av virus samlet fra celledyrkningssupernatant av HSMB-virus. Den generelle tilstand til fisken ble registrert daglig og enhver mortalitet ble summert på daglig basis (ingen mortalitet var forventet fra utfordringen). Alle andre mortaliteter, som skyldes andre forhold, som forekom under forsøksforløpet, ble registrert.

Fisk ble enten foret med en kontrolldiett eller de to forskjellige eksperimentdietter anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 i samsvar med oppfinnelsen. Pelletstørrelsen av alle dietter var 3,5 mm. Diettene omfattet konvensjonelle foringredienser som vanligvis finnes i fiskefor så som proteiner, lipider, karbohydrater, vitaminer, mineraler. Sammensetningene av diettene var som følger (tabell 1):

Det ble tatt prøver av fisken i jevne intervaller etter 8, 10, 12,14 og 16 uker, og histologiske prøver av hjertemuskel og lever ble analysert med hensyn til histopatologiske forandringer som beskrevet nedenfor. Totalt ble 360 fisk analysert fra foringseksperimentet.

Histopatologien av hjerte og lever ble utført av en profesjonell veterinærtjeneste. Prøvene ble fiksert i 10 % nøytral fosfatbufret formalin. Formalinfikserte prøver ble separert for histologisk undersøkelse med standard parafinboksteknikker og farget med hematooksylin og eosin (H & E).

De histologiske forandringer har blitt evaluert på basis av en forutbestemt kategorisering av forandringer i hjertet. Fokus var på kardisk inflammasjon: Endotelforandringer i grenselinjen mellom det kompakte sjikt og det spongioøse sjikt i hjertet var viktige parametere i karakteriseringen. I tidlige faser var svelling og proliferasjon viktig, etterfulgt av infiltrering med mononukleære inflammatoriske celler -Infiltrering av inflammatoriske celler i det kompakte sjikt, fokalt eller diffust i utseende -infiltrering av inflammatoriske celler i det spongiøse sjikt, fokalt eller diffust i utseende ledsaget av degenerering og nekrose av myocytter, og svelling av de endoteliale celler som belegger de spongiøse moyfibre. Score var tilgjengelig fra 8, 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring. Score fra 8 uker ble utelatt fra analysen siden kun et total på 5 fisk ble undersøkt (2 fra en diett og 3 fra en annen). Histologiske forandringer i epikard og myokard ble rangert i samsvar med en ikke- kontinuerlig score gradert fra 0 til 4 (0 indikerer ingen patologi, normalt vev; 4 indikerer intens inflammasjon). En beskrivelse av hver av scorene for epikard og myokard er inkludert i tabell 3.

Lever histopatologi ble studert med forandringer relatert til mikro- og makro vesikulær steatose. Dette er karakterisert med varierende grader av vakuole-dannelse i cytoplasma i hepatocyttene. Gradering av score fulgte en ikke-kontinuerlig score fra 0 til 5, hvor 5 er det score som indikerer den høyeste grad av steatose i lever (fettlever). En beskrivelse av hver av graderings scorene er som følger.

Score 0: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 10 % av hepatocyttene og inkluderende mindre enn 25 % av området for de individuelle hepatocytter.

Score 1: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 25 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 25 % av området for de individuelle hepatocytter.

Score 2: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 50 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 50 % av området for de individuelle hepatocytter.

Score 3: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 75 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 75 % av området for de individuelle hepatocytter.

Score 4: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 90 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 80 % av området for de individuelle hepatocytter.

Score 5: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 90 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 80 % av området for de individuelle hepatocytter.

All preparering av data- og simuleringsutgangsanalyser ble utført med "R language"

(R: A Language and Environment for Statistical Computing, R Development Core Team, R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria, 2009, ISBN 3-900051-07-0, http:// www. R- project. org). Individuelle vektøkningsdata ble analysert ved anvendelse av en lineær blandet-effekter modell (multinivåmodell) tilpasset mellom responsen og prediktor ved å tillate at skjæringspunktene kan variere fra tank til tank for å ta hensyn til tanknivå korrelasjoner og variabilitet. Modellen var en blandet-effekter lineær modell estimert med en Imerfunksjon i Ime4-pakken. Behandlingsestimatene ble basert på posterior-simulering (n=2500) med 95 % konfidensintervaller som absolutt og proporsjonal til referansenivået (kontrolldiett).

Histopatologiske score ble analysert ved anvendelse av multinivå-ordnet kategorisk logistisk revisjon på grunn av at dataene er multinominale. Modellen var skrevet i (BUGS language (Lunn, D.J., Thomas, A., Best, N., and Spiegelhalter, D. (2000) WinBUGS - a Bayesian modelling framework; concepts, structure, and extensibility. Statistics and Computing, 10:325-337) og tilpasset med JAGS (JAGS= Just another Gibbs Sampler, Plummer, M. (2009) JAGS Version 1,03 manual, http:// wwwfis. iarc. fr/- martyn/ software/ iags/).

Vage ikke-informative uniforme priorer [0,100] ble gitt for variansparameterne, og vage ikke-informative normale priorer (0,1,0E+4) for alle andre parametere. 25000 "innkjørings"-simuleringer ble anvendt for å adaptere Markov Chain Monte Carlo (MCMC) påfølgende 2500 kjøringer som ble anvendt for interferens. Tre rekker ble kjørt i parallell, det vil si det var et total på 7500 simuleringer for interferens. Disse ble uttynnet slik at kun hver tiende simulering ble lagret for å redusere størrelsen av lagrete objekter og for å redusere effektene av autokorrelasjon. I sum, posterior tetthet er basert på 750 trekk fra den posteriore sannsynlighetsfordeling. Konvergens av MCMC-simuleringen ble vurdert med den såkalte Gelman-Rubin konvergens-diagnostikk (Gelman, A- and Rubin, D.B. (1992) Inference from iterative simulation using multiple sequences, Statistical Science, 7, 457-511).

Resultatene fra foringseksperimentene viser at det er mulig å redusere påvirkningen av HSMB-sykdom gjennom dietten. Ved å anvende spesifikke diettformuleringer er det mulig å redusere både hjerteskade og leversteatose under sykdomsutbrudd.

Hovedforandringene som er observert mellom diettgruppene var i myokardium, mens det ikke var klare forskjeller mellom diettene observert i epikardium.

Med hensyn til myokardium, ved 10 uker postutfordring kunne ingen signifikante forskjeller i myokardiske score mellom diettene observeres siden 95 % konfidensintervaller krysset den stiplete linje (figur 3a). Etter hvert som sykdommen utviklet seg syntes det som om scorene ble mer alvorlige for kontrollforet ved 14 og 16 uker sammenlignet med 10 og 12 uker (negative koeffisienter for kontrollfor i fig 3). Ved 12 uker postutfordring startet myokardisk å vise en trend mot forskjeller mellom dietter og 99 % av fisken foret med diett anti- HSMB 1 hadde myokardiske score lik eller lavere enn 1, og for diettkontroll og anti- HSMB 2 rundt ca 96 % av fisken hadde score lik eller lavere enn 1 (figur 2b); de statistiske analyser viste at diett anti- HSMB 1 hadde høyere koeffisienter resulterende i bedre (lavere score) enn kontrollforet ved uke 12, imidlertid kan det på dette tidspunkt kun vurderes som en trend siden 95 %

koeffisientintervaller krysset svakt den stiplete linje (figur 3b). Ved uke 14

postutfordring hadde 62 % av fisken foret med kontrolldiett myokardiske score lik eller lavere enn 1, sammenlignet med 86 % med diett anti- HSMB 2 og 96 % med diett anti- HSMB 1 (figur 2c). Ved uke 16 postutfordring, hadde 94 % av fisken foret med diett anti- HSMB 1 myokardiske score lik eller mindre enn 1 sammenlignet med 85 % og 51 % på dietter anti- HSMB 2 og kontroll, respektivt (figur 2d). Forskjellene mellom dietter anti- HSMB 1 og kontroll ved 14 og 16 uker var statistisk signifikant siden høyere koeffisienter resulterer i signifikant bedre (lavere) myokardiske score observert med for anti- HSMB 1 sammenlignet til kontrollfor (figur 3c). Tilsvarende positive effekter, men mye mildere og mindre sikre, ble observert med for anti-HSMB 2, imidlertid ikke statistisk signifikant (figur 3d). Med hensyn til epikardium, ved 10 uker postutfordring for alle for er 91- 92 % av de epikardiske score lik eller lavere enn 1, og ca 40 % av scorene var 0 for alle for (figur 4a). Ved 12 uker postutfordring hadde foret anti- HSMB 2 noe lavere sannsynlighet (81 %) av fisken hadde epikardiske score lik eller lavere enn 1 sammenlignet med 90 % for diettkontroll og 92 % for diett anti- HSMB 1, selv om disse forskjeller ikke var signifikante (figur 4b). Ved uke 14 postutfordring var der en trend for for anti- HSMB 1 med en høyere sannsynlighet på 85 % til å ha epikardiske score lik eller lavere enn 1 sammenlignet med 69 % og 63 % sannsynlighet for diettene anti- HSMB 2 og kontroll, respektivt (figur 4). Ved uke 16 postutfordring fremkom det at diettene anti-HSMB 1 og anti- HSMB 2 hadde høyere sannsynligheter (90 % og 85 %, respektivt) av epikardiske score lik eller lavere enn 1 enn kontrollfor (74 %). Selv om dette ikke kan kreves som signifikant, fremkommer en klar trend for for anti- HSMB 1 i å forbedre den patologiske status til fisken (figur 4d).

Således, klare effekter på diettbehandlinger på den inflammatoriske status av fisken ble observert fra 12 uker og utover (figur 3-4), hvor spesielt dietten anti-HSMB 1 resulterte i en redusert inflammasjon på hjertet som indikert med høyere sannsynlighet på å ha lave histopatologiske score sammenlignet med kontrolldietten. Enda mer markante forskjeller ble observert senere i foringseksperimentet etter 14 og 16 uker av foring med anti- HSMB dietter 1 og 2 sammenlignet med kontrollgruppen. Dette betyr at fisk foret med anti- HSMB diett 1 hadde signifikant mindre skade sammenlignet med kontrolldietten.

Resultatene viser overraskende og klart potensiale for disse diettsammensetninger i modulering og behandling av HSMB- sykdom i Atlantisk laks.

Fisk som lider av HSMB- sykdom har blitt beskrevet å ha forandringer i leveren. Således, leveren er gulaktig, viser et øket fettinnhold (vanligvis kjent som hepatisk steatose) og noen ganger har nekrotiske foki blitt observert hvor cellene er vakuolert og pyknotiske. Foring med nye diettsammensetninger til HSMB-infisert Atlantisk laks overraskende påvirket den patologiske status av leveren (figurer 6- 7).

Ved 10 uker postutfordring hadde fisk foret med dietter anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 klart høyere sannsynlighet for å ha lavere score (det vil si score mindre eller lik 1)

(79 % og 72 % respektivt) sammenlignet til 16 % for kontrolldiett fisken (figur 6a). Koeffisientene for foringer med anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 var signifikant bedre (lavere score - mindre steatose) ved 10 uker (figur 6a). Ved 14 uker postutfordring hadde for anti-HSMB 1 også høyere sannsynlighet (74 %) for å ha lavere score (det vil si indikerende en lavere grad av hepatisk steatose) sammenlignet med 40 % for for anti-HSMB 2 og til 23 % for kontrollfor. Disse forskjeller var signifikant lavere for diett anti-HSMB 1, mens en trend fremkom for diett anti-HSMB 2 sammenlignet med kontroll (figur 7c).

Således, klare effekter av anti- HSMB 1 dietter på leverstatus av fisken ble observert ved 10 og 14 uker (figur 6-7), hvor spesielt dietten anti-HSMB 1 resulterte i en redusert hepatisk steatose indikert med høyere sannsynlighet for å ha lave histopatologiske score sammenlignet med kontrolldietten. Disse effekter ble spesielt observert ved 10 og 14 uker postutfordring.

I tillegg, klare signifikante forskjeller i vektøkning ble observert mellom dietter preutfordring (figur 8). Fisk vokste 89,82 g, 109,90 g og 107,28 g respektivt for diettkontroller, anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 (det vil si 23 % og 20 % mer enn kontrolldietten sammenlignet med anti-HMSI-diettene) etter 8 ukers foringsperiode før utfordring.

De(n) eksakte mekanisme(r) bak denne overraskende effekt i å redusere hjerteinflammasjon i HSMB-infisert fisk med de nye diettsammensetninger i samsvar med foreliggende oppfinnelse er ikke klare enda. Et høyt innhold av n-3 fettsyrer, spesielt av fettsyren eikosapentaensyre (EPA20:5n-3) er fordelaktig. Videre, et redusert innhold av lipider kombinert med et øket innhold av protein, sammenlignet med konvensjonelle forsammensetninger anvendt for vekst av de samme arter, syntes å være fordelaktig for modulering av HMSI-sykdommer.

Figur 9 viser at nivået av fettsyren eikosapentaensyre (EPA 20:5n-3) akkumulerer i hjertevev, og uten å være bundet av mekanisme antas det at dette økte nivå av EPO på rett sted i fiskekroppen, dvs. i hjertevevet, er gunstig for HSMB-infisert fisk.

Ytterligere, i en foretrukket utførelse i samsvar med foreliggende oppfinnelse anvendes søramerikansk fiskeolje som inneholder omtrent dobbelt så mye EPA som Nordisk Atlantisk fiskeolje for å øke innhold av EPA i anti-HSMB diettene.

Videre, en reduksjon av innhold av n-6 fettsyrer, som typisk finnes i vegetabilske oljer, syntes å være nyttig i modulering av HSMB-sykdommen. Resultatet indikerer også at et redusert n-3/n-6-forhold slik at dette er i området 2,3 - 3,4 kan være fordelaktig.

Lever til HSMB- infisert fisk påvirkes av sykdommen som beskrevet over. Dette kan ha en effekt på lipidfordøyelighet i fisken. I en foretrukket utførelse av foreliggende oppfinnelse tilsettes vegetabilske oljer til diettene i en hydrolysert form. Det syntes også fordelaktig å inkludere hydrolyserte fosforlipider til dietten.

Det kan også være nyttig å tilføye krillmel og/eller krillolje til dietten. Fortrinnsvis, dietten kan videre omfatte nukleotider, antiinflammatoriske forbindelser og/eller mannaoligosakkarider (MOS).

Det antas at forsammensetningen i samsvar med foreliggende oppfinnelse også er relevant for andre teleostarter enn salmonider som kan påvirkes av HSMB.

Det skal innses at egenskapene av foreliggende oppfinnelse som beskrevet i foregående kan modifiseres uten å avvike fra rammen av oppfinnelsen.

«FA» er forkortelsen som anvendes for "fettsyrer"

«n-3 fettsyrerer» en familie umettete fettsyrer som har som felles en final karbon-karbon dobbeltbinding i n-3 posisjon, som er den tredje binding fra metylenden av fettsyren. Disse fettsyrer er også kjent som omega 3 fettsyrer.

«n-6 fettsyrer» er en familie umettete fettsyrer som har som felles en final karbon-karbon dobbeltbinding i n-6 posisjon som er den sjette binding fra metylenden av fettsyren. Disse fettsyrer er også kjent som omega 6 fettsyrer.

Med termen «n-3/n-6-forhold» menes forholdet mellom fettsyrer tilhørende n-3-familien og de som tilhører n-6-familien i sammensetningen eller dietten.

«Protein/lipid-forhold» angir forholdet mellom proteiner og lipider i sammensetningen eller dietten (hver av dem relatert til vekten av dietten).

«HSMB» er forkortelsen som anvendes for "hjerte og skjelettmuskel inflammasjons-sykdom".

Termen "konvensjonelle foringredienser" refererer til ingredienser som vanligvis er en del av et fiskefor så som proteiner, lipider, karbohydrater, vitaminer, mineraler, etc. Ingrediensene kan være avledet fra marine, vegetabilske, animalske biprodukter, og/eller av enhver annen relevant kilde og kan anvendes i enhver egnet kombinasjon.

Termen "nukleotider" refererer til molekyler som omfatter en nitrogenbase (purin-eller pyrimidinbase), et femkarbonsukker og 1 til 3 fosfatgrupper.

Claims

1. Forsammensetning for fisk for anvendelse i å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom, omfattende konvensjonelle foringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, karakterisert ved at protein: lipid-forholdet (vekt/vekt) i foret er høyere enn 2, fortrinnsvis høyere enn 2,7 for.

2. Forsammensetning i samsvar med krav 1, karakterisert ved at protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i foret er høyere enn 2,7.

3. Forsammensetning i samsvar med krav 1, karakterisert ved at proteinet utgjør mer enn 50% (basert på vekt) av dietten, fortrinnsvis mer enn 52% og at lipidene utgjør mindre enn 20% (basert på vekt), fortrinnsvis 28% av dietten.

4. Forsammensetning i samsvar med krav 1, karakterisert ved at mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, fortrinnsvis mer enn 23%, mer fortrinnsvis 24%.

5. Forsammensetning i samsvar med krav 1, karakterisert ved at sammensetningen omfatter mer enn 23% n-3 fettsyrer og mindre enn 11 % n-6 FA av de totale fettsyrer.

6. Forsammensetning i samsvar med krav 1 eller 4, karakterisert ved at innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 er mer enn 7% av de totale fettsyrer, fortrinnsvis mer enn 9%, mer fortrinnsvis 10,2%.

7. Forsammensetning i samsvar med krav 1, karakterisert ved at sammensetningen er i hovedsak som angitt for anti-HSMB diet 1 eller for anti-HSMB diet 2 i tabell 1 eller tabell 2.

8. Forsammensetning i samsvar med krav 1, karakterisert ved at sammensetningen omfatter mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.

9. Forsammensetning i samsvar med krav 8, karakterisert ved at fortrinnsvis mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.

10. Forsammensetning i samsvar med krav 8, karakterisert ved at fortrinnsvis mer enn 24% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.

11. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) er mer enn ca. 7% av de totale fettsyrer.

12. Forsammensetning i samsvar med krav 11, karakterisert ved at innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) er mer enn ca. 8% av de totale fettsyrer, mer fortrinnsvis 9%, mer foretrukket mer enn ca. 10%, så som ca. 10,2%.

13. Forsammensetning i samsvar med et av kravene 1-12, karakterisert ved at sammensetningen er for laksefisk og at sammensetningen har et redusert innhold av lipider og et øket innhold av proteiner sammenlignet med kommersielle forsammensetninger anvendt for laksefisk i samme alder, størrelse og/eller utviklingstrinn.

14. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at innholdet av n-6 fettsyrer er mindre enn 11 % av de totale fettsyrer, fortrinnsvis i området 7-11%, mer foretrukket ca. 10%.

15. Forsammensetning i samsvar med krav 14, karakterisert ved at innholdet av n-3 fettsyrer er mer enn 23% og nivået av n-6 fettsyrer er mindre enn 11 % av de totale fettsyrer.

16. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at forholdet n-3 til n-6 fettsyrer er høyere enn 1,6, fortrinnsvis mer enn 2,2, mer foretrukket mellom 2,3 og 3,4.

17. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at en andel av nevnte lipider er søramerikansk fiskeolje.

18. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at innholdet av tilsatt vegetabilsk olje er mindre enn 0,5%, fortrinnsvis 0,2% basert på vekten av sammensetningen, og at oljen fortrinnsvis tilsettes som et hydrolysat.

19. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at sammensetningen omfatter hydrolyserte fosfolipider, fortrinnsvis ca. 0,1-0,2 vekt% av dietten, mer foretrukket mer enn 0,2 vekt% av dietten.

20. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at nevnte sammensetning omfatter krillmel, fortrinnsvis ca. 5 vekt%, mer foretrukket mer enn 5 vekt% av dietten.

21. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at foret ytterligere omfatter nukleotider og/eller manna-oligosakkarider og/eller anti-inflammatoriske forbindelser så som flavonoider.

22. Forsammensetning i samsvar med et av de foregående krav, karakterisert ved at nevnte proteiner utgjør mer enn 50% (basert på vekt) av sammensetningen, hvor lipidene utgjøre mindre enn 20% (basert på vekt), hvor mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.

23. Forsammensetning i samsvar med krav 22, karakterisert ved at proteinet utgjør mer enn 52% (basert på vekt) av sammensetningen, og hvor lipidene utgjør mindre enn 18% (basert på vekt), fortrinnsvis 18% av dietten, hvor mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.

24. Anvendelse av forsammensetningen i samsvar med et av kravene 1-23 for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning og/eller ernæringssammensetning og/eller funksjonelt for for profylakse og/eller behandling av hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom.

25. Anvendelse av forsammensetningen i samsvar med krav 24, for å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom i fisk.

26. Anvendelse i samsvar med krav 24, hvor nevnte fisk er en laksefisk, flatfisk eller en annen fiskeart egnet for akvakultur, fortrinnsvis artene atlantisk laks ( Salmo salar).

27. Anvendelse i samsvar med krav 24, for effektiv gjenvinning etter hjerte- og skjelettmuskelinflammasjonsinfeksjon, og/eller reduksjon av risiko for reinfeksjon.

28. Fremgangsmåte for å fore fisk som er mottakelig for en hjerte- og skjelettmuskelbetennelsesinfeksjon, karakterisert ved at en sammensetning i samsvar med et av kravene 1-23 fores til fisken i en periode før utfordring av en infeksjon, under infeksjonen og etter at fisken har blitt infisert.

29. Fremgangsmåte i samsvar med krav 28, karakterisert ved at sammensetningen fores i en periode på minst 8 uker pre infeksjon, mer fortrinnsvis 10-16 uker, mest foretrukket 16-20 uker og 8-20 uker post infeksjon.

Drawings

Priority

14.09.2009 NO 20093000

Patent classes

IPC classes

A23K 50/80

A23K 50/42

A23K 20/147

A23K 20/158

A61P 31/12

A23K 1/00

A23K 1/18

CPC classes

A23K 50/80

A23K 50/42

A23K 20/147

A23K 20/158

Citations

NO 321190 B1 (B1)

Biomar fôrkatalog, august 2009, Optimalisert fôr til settefisk. ()

Applicants, owners and inventors

Applicants

Aker Biomarine ASA

Postboks 1423 Vika

0115 OSLO

NO (OSLO Municipality, Oslo county)

Org. number: 913915062

Chemoforma Ltd

Rheinstrasse 28-32

4302 AUGST

Ewos Innovation AS

4335 DIRDAL

NO (GJESDAL Municipality, Rogaland county)

Org. number: 911501252

Inventors

Sigve Nordrum

Åssletta 3

1341 SLEPENDEN

NO (BÆRUM Municipality, Akershus county)

José Luis González Vecino

Hetlandsgt. 26

4013 STAVANGER

NO (STAVANGER Municipality, Rogaland county)

Simon Wadsworth

Hjerteskjellveien 8

4310 HOMMERSÅK

NO (SANDNES Municipality, Rogaland county)

Agent

ACAPO AS

Edvard Griegs vei 1

5059 BERGEN

NO (BERGEN Municipality, Vestland county)

Org. number: 915113737

Reference: P12061NO02

Status history

Payment history

Oppositions and appeals

No oppositions or appeals

Administrative limitation

No administrative limitation

Liens and licences

No liens or licenses registered

Gazette entries

No Gazette entries found

Only events from 2024.03.04 and onwards are shown.

Fôrsammensetning for fisk for anvendelse i å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og...