Key information

Title
Propyl-metyl-fenol-forbindelse og sammensetning for anvendelse i behandling og /eller profylakse av sykdommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis
Application number
20121253
Case type
PCT-based
Status
19.09.2022 Patent meddelt (B1)
Filed
26.10.2012
Divided to
20140949 (348141)20220848
Priority
26.03.2010 NO 20100454
International application date
28.03.2011
International application number
PCT/NO2011/000106
Effective date
28.03.2011
Publicly available
21.11.2012
Next annual fee due
31.03.2027
Applicant
Ewos Innovation AS (NO)
Owner
Ewos Innovation AS (NO)
Inventor
José Luis González Vecino (NO) et al.
Agent
ACAPO ONSAGERS AS (NO)
Granted
19.09.2022
Patent number
346522
Expiry date
28.03.2031

Abstract and drawing

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content.
Det beskrives en propyl-metyl-fenolforbindelse, spesielt Thymol og/eller Carvacrol eller sammensetninger omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av salmonid rickettsial septikemi (SRS) og/eller syk dommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av Piscirickettsia salmonis, og for anvendelse i behandling og/eller profylakse av infektiøs lakseanemi (ISA) og/eller sykdommer forårsaket av infektiøs lakseanemivirus, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av infektiøs lakseanemivirus.

Publications

B1A1
Checking availability of the latest published version...

Documents

 Expand Download files (47)
Date
 Date Doc. No. Process Case number In/Out Journal description To/from
 26.09.2022 21-01 Saksbehandling 20121253(346522) UT PT Registreringsbrev nasjonal patent (15) (PT20121253)
15.06.2022 20-01 Saksbehandling 20121253 UT PT Meddelelse om patent ACAPO AS
 16.12.2021 19-06 Saksbehandling 20121253 INN P15255NO01 2021-12-16 Response to NIPO ACAPO AS
 16.12.2021 19-05 Saksbehandling 20121253 INN P15255NO01 - Amended description 2021-12-16 - marked version ACAPO AS
 16.12.2021 19-04 Saksbehandling 20121253 INN P15255NO01 - Amended description 2021-12-16 - clean version ACAPO AS
 16.12.2021 19-03 Saksbehandling 20121253 INN P15255NO01 - Amended claims of 2021-12-16 - marked version ACAPO AS
 16.12.2021 19-02 Saksbehandling 20121253 INN P15255NO01 - Amended claims of 2021-12-16 - clean version ACAPO AS
 16.12.2021 19-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 24.09.2021 18-01 Saksbehandling 20121253 UT Realitet patent ACAPO AS
 21.04.2021 17-03 Saksbehandling 20121253 INN P15255NO01 Response to office action ACAPO AS
 21.04.2021 17-02 Saksbehandling 20121253 INN P15255NO01 request for reinstatement ACAPO AS
 21.04.2021 17-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 14.01.2021 16-01 Saksbehandling 20121253 UT PT Henlagt manglede svar ACAPO AS
 27.10.2020 15-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 27.07.2020 14-02 Saksbehandling 20121253 UT PT report 12:24:02
27.07.2020 14-01 Saksbehandling 20121253 UT Realitet patent ACAPO AS
 23.05.2020 13-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 07.02.2019 12-04 Saksbehandling 20121253 INN Krav ACAPO AS
 07.02.2019 12-03 Saksbehandling 20121253 INN Krav med sporing ACAPO AS
 07.02.2019 12-02 Saksbehandling 20121253 INN Hovedbrev ACAPO AS
 07.02.2019 12-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 07.12.2018 11-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 07.09.2018 10-01 Saksbehandling 20121253 UT Realitet patent ACAPO AS
 24.11.2017 09-04 Saksbehandling 20121253 INN Krav ME Acapo AS
 24.11.2017 09-03 Saksbehandling 20121253 INN Hovedbrev Acapo AS
 24.11.2017 09-02 Saksbehandling 20121253 INN Krav Acapo AS
 24.11.2017 09-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) Acapo AS
 24.05.2017 08-02 Saksbehandling 20121253 UT PT report 03:12:13
24.05.2017 08-01 Saksbehandling 20121253 UT Realitet patent Acapo AS
 05.12.2014 03-08 Protest 2014/00510 UT Nytt overprøvningskrav (OP) 20121253
05.12.2014 03-07 Protest 2014/00510 UT PL1 KR20070054919 418473
05.12.2014 03-06 Protest 2014/00510 UT 3rd Party Observation EPO 418474
05.12.2014 03-05 Protest 2014/00510 UT NPL4 Rattanachaikunsopon Af J Microb Res 418468
05.12.2014 03-04 Protest 2014/00510 UT NPL1 Ching Feed Technology 418472
05.12.2014 03-03 Protest 2014/00510 UT NPL2 Baricevic and Bartol Part 5 Pharmacology 418470
05.12.2014 03-02 Protest 2014/00510 UT NPL3 Yagnisis et al EAFP International Conference 418469
05.12.2014 03-01 Protest 2014/00510 UT PR02: Melding til søker Acapo AS
 05.12.2014 02-01 Protest 2014/00510 UT PR03: Informasjon til kravstiller Håmsø Patentbyrå AS
28.11.2014 01-07 Protest 2014/00510 INN NPL4 Rattanachaikunsopon Af J Microb Res 418468
28.11.2014 01-06 Protest 2014/00510 INN 3rd Party Observation EPO 418474
28.11.2014 01-05 Protest 2014/00510 INN PL1 KR20070054919 418473
28.11.2014 01-04 Protest 2014/00510 INN NPL3 Yagnisis et al EAFP International Conference 418469
28.11.2014 01-03 Protest 2014/00510 INN NPL2 Baricevic and Bartol Part 5 Pharmacology 418470
28.11.2014 01-02 Protest 2014/00510 INN NPL1 Ching Feed Technology 418472
28.11.2014 01-01 Protest 2014/00510 INN Nytt overprøvningskrav (OP) 20121253
07.02.2013 07-04 Saksbehandling 20121253 INN Overdragelsesdokument Acapo AS
 07.02.2013 07-03 Saksbehandling 20121253 INN Fullmakt Acapo AS
 07.02.2013 07-02 Saksbehandling 20121253 INN Overdragelsesdokument Acapo AS
 07.02.2013 07-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (hoved dok) Acapo AS
 09.01.2013 06-01 Saksbehandling 20121253 UT Patent - Reminder of first annual fee (2013.01.09)
21.12.2012 05-01 Saksbehandling 20121253 UT Formalia 1 Acapo AS
 22.11.2012 03-03 Saksbehandling 20121253 INN Hovedbrev Acapo AS
 22.11.2012 03-02 Saksbehandling 20121253 INN Krav Acapo AS
 22.11.2012 03-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (hoved dok) Acapo AS
 21.11.2012 02-03 Saksbehandling 20121253 INN Patenttegninger Acapo AS
 21.11.2012 02-02 Saksbehandling 20121253 INN Beskrivelse Acapo AS
 21.11.2012 02-01 Saksbehandling 20121253 INN Korrespondanse (hoved dok) Acapo AS
 26.10.2012 01-02 Saksbehandling 20121253 INN PCT pamflett
26.10.2012 01-01 Saksbehandling 20121253 INN National Patent Application Form

Description, claims and drawings

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content. Description
Område for oppfinnelsenDen foreliggende oppfinnelse vedrører en propyl-metyl-fenol-forbindelse eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenol-forbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av salmonid rickettsial septikemi (SRS - Salmonid rickettsial septicemia) og/eller sykdommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av Piscirickettsia salmonis.Salmonid rickettsial septicemia (SRS), patogen agent Piscirickettsia salmonisSalmonid rickettsial septikemi (SRS), også kjent som fiskerickettsiose, er en fatal sykdom i laksefisk. Selv om det etologiske agent for SRS ble identifisert på slutten av 1980-årene som Piscirickettsia salmonis, har antibiotika vist seg å ikke være noen suksess i behandling, grunnet, delvis den intracellulære natur til denne bakterie. Som en konsekvens av mangel på en levedyktig behandling, dør millioner av oppdrettslaks av SRS hvert år kun i Sør-Chile.Piscirickettsia salmonis er en liten, intracellulær bakterie som forårsaker en fatal septikemisk tilstand i salmonider. Siden innledende isolering i de sene 1980-årene, har P. salmonis vært den primære årsak for mortalitet i industrien i Chile. I løpet av 1995 døde mer enn 10 millioner laks i marin oppdrettsindustri. Mesteparten av tapet skyldes P. salmonis med den økonomiske effekt estimert til $49 millioner USD. På grunn av at P. salmonis er intracellulær (lever på innsiden av cellene av verten), er effektivitet av antibiotikabehandling av infisert laks dårlig. Vaksineutvikling har også vist seg å være vanskelig på grunn av den intracellulære natur til organismen. Bruk av antimikrobielle midler, så som oksolinsyre, har vært utstrakt i en rekke år i Chile og nådde 127 tonn (aktiv forbindelse) i 2003. Intet antibiotisk eller kjemoterapeutisk middel har vist seg å være vedvarende effektiv mot P. salmonis, og økende resistens har blitt til påvist. Utvikling av en bred antibiotisk resistens vil forårsake signifikante driftsproblemer og en betydelig finansiell effekt på industrien.Det er derfor svært viktig å finne nye forbindelser og nye måter å behandle og hindre sykdommer i fisk forårsakede av Piscirickettsia salmonis.Tidligere kjent teknikk i form av:- Ching, CYY, 2008, «Improving aquaculture production through…», Feed Technology Update 3 (1), January 2008;- Baricevic,D. & Bartol, T., 2002, «The biological/pharmacoligical activity of Origanum genus. In Part 5 Pharmacology 177-213, Taylor & Francis;- Yiagnisis M et al.2009. “Effect of dietary oregano essential oil supplementation on combined infections by pathogenic bacteria-parasites (sea lice and copepods) in European sea bass Dicentrarchus labrax L”., 14th EAFP International Conference, Prague, September 14-19, 2009, Diseases of Fish and Shellfish.; og- Rattaachaikunsopon P & Phumkhachorn P., 2010, “Assessment of synergistic efficacy of carvacrol and cymene against Edvardsiella tarda in vitro and in Tilapia (Oreochromis niloticus)”, Af.J.Microb. Vol 4 (5) p 420-425, beskriver bruken av sammensetninger som omfatter thymol eller carvacrol som antibakterielle midler innen akvakultur. Imidlertid inneholder ingen av disse dokumentene noen informasjon om effektiviteten av propyl-metyl-forbindelser mot Salmonid rickettsial septikemi (SRS) og/eller sykdommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis.WO 2004091307 A2 beskriver et bredt spekter av forbindelser, inkludert mulige fenol-forbindelser, f.eks. thymol og carvacrol, eller vegetabilske oljer eller ekstrakter av oregano. Videre beskrives en rekke infeksjonssykdommer som skal behandles. Imidlertid er bruken av forbindelsene og behandlingen ifølge foreliggende oppfinnelse ikke beskrevet. Det objektive tekniske problem ifølge foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe nye effektive midler og fremgangsmåter for å drepe eller regulere Piscirickettsia salmonis.Sammendrag av oppfinnelsenEt første aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en propyl-metyl-fenolforbindelse, eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenol-forbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av salmonid rickettsial septikemi (SRS) og/eller sykdommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av Piscirickettsia salmonis.Foretrukne utførelser av første aspekt ifølge foreliggende oppfinnelse er gitt i underkravene 2-12, og vedrører én eller flere av følgende trekk:- nevnte forbindelse er isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 5-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.- sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.- konsentrasjonen er ca.3,7 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.15 mg/kg som en komponent av et fôr.- konsentrasjonen er ca.100 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.120 mg/kg som en komponent av et fôr.- sammensetningen er en fôrsammensetning og hvor mengden av Carvacrol og Thymol er ca.30 ppm eller mer av nevnte fôrsammensetning, for eksempel mengden av Carvacrol er ca.15 ppm og mengden av Thymol er ca.15 ppm.- forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.- nevnte fisk er en Salmonidae.- nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus). Et andre aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en anvendelse av en propylmetyl-fenol-forbindelse, eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse for fremstilling av en farmasøytisk og/eller nutrasøytisk sammensetning for behandling og/eller profylakse av salmonid rickettsial septikemi (SRS) og/eller sykdommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av Piscirickettsia salmonis.Foretrukne utførelser av det andre aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører én eller flere av følgende trekk:- nevnte forbindelse er isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 5-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.- sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.- konsentrasjonen er ca.3,7 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.15 mg/kg som en komponent i et fôr.- konsentrasjonen er ca.100 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.120 mg/kg som en komponent av et fôr.- sammensetningen er en fôrsammensetning hvor mengden av Carvacrol og Thymol er ca.30 ppm eller mer av nevnte fôrsammensetning, for eksempel hvor mengden av Carvacrol er ca.15 ppm og mengden av Thymol er ca.15 ppm.- forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.- nevnte fisk er en Salmonidae.- nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).Et tredje aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for å drepe, bekjempe eller regulere Piscirickettsia salmonis, hvor fremgangsmåten omfatter å applisere en propyl-metyl-fenol-forbindelse eller en sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenol-forbindelse. Foretrukne utførelser av tredje aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører én eller flere av følgende trekk:- nevnte propyl-metyl-fenol-forbindelse appliseres til et lokus som skal beskyttes fra nevnte bakteria.- nevnte lokus er et vandig miljø og hvor propyl-metyl-fenol-forbindelsen appliseres direkte til det vandige lokus.- nevnte lokus inneholder fisk og som er mottakelige til infeksjoner forårsaket av Piscirickettsia salmonis, hvor propyl-metyl-fenol-forbindelsen appliseres direkte til fisken, fortrinnsvis med topikal eller oral applisering.- propyl-metyl-fenol-forbindelsen appliseres til fisken som en komponent av fôret som mates til fisken.- nevnte forbindelse er isopropyl-metyl-fenol, fortrinnsvis 2-isopropyl-metyl-fenol. - nevnte forbindelse er 5-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.- sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.- forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.- nevnte fisk er en Salmonidae.- nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).Detaljert beskrivelse av oppfinnelsenUtførelser av oppfinnelsen vil nå bli beskrevet, ved hjelp av eksempler med referanse til følgende figurer, hvor:Figur 1 viser observert overlevelse av regnbueørret med et utbrudd av SRS gitt forskjellige behandlinger som beskrevet i eksempel 3. Hver kurve angir at bur.«Kontroll» er et kommersielt fôr (EWOS Silva), hvor «BG» er en boost premiks, og «BG ny» er boost premiks og 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol, dvs. et representativt eksempel på en «forbindelse i samsvar med oppfinnelsen».Figur 2 viser estimerte risikoforhold (relativ risiko for død) i relasjon til kontrollfôr (risiko tatt som 1 og markert med stiplet rød horisontal linje). Feilmarginer viser 95% pålitelighetsintervaller. «BG» er en boost premiks, og «BG ny» er boost premiks og 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol.Figur 3 viser CT-verdiene for P. salmonis i hjernevev ved initiering av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR.Figur 4 viser CT-verdiene for P. salmonis i hjernevev ved slutten av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR.Figur 5 viser CT-verdiene for P. salmonis i nyrevev ved initiering av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR.Figur 6 viser CT-verdiene for P. salmonis i nyrevev ved slutten av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR.Eksperimentell seksjonEksempel 1 - effekt av carvacrol på Piscirickettsia salmonisFormålet med dette forsøk er å evaluere effektiviteten av carvacrol, og en kombinasjon av carvacrol og tymol mot Piscirickettsia salmonis (P. salmonis) med in vitro bestemmelse av Minimum Inhibitorisk Konsentrasjon (MIC). Materialer og metoderFremstilling av testforbindelseneFremstilling av arbeidsløsninger av carvacrol og tymol ble utført av Laboratory of Ecological Chemistry, Faculty of Chemistry, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Carvacrol (Sigma Aldrich 98% standard kvalitet) ble fortynnet i destillert vann/etanol-løsning opp til 200 ppm (benevnt "CAR1"). Carvacrol tymol (Sigma Aldrich 98% standard kvalitet) 1:1 (volum:volum) ble fortynnet i DMSO/destillert vann ved 200 ppm (benevnt "CAR2"). Alle produkter, forrådsløsninger og arbeidsløsninger ble lagret under avkjøling (4°C) og ble håndtert under et laminært strømningskammer for å unngå kontaminering av produktene som skal evalueres.Antibakteriell effektivitetEvalueringen av MIC av de forskjellige løsninger av carvacrol og tymol mot P. salmonis ble utført ved ADL Diagnostics, Puerto Montt, Chile. Seks forskjellige isolater av P. salmonis ble oppnådd fra kliniske tilfeller mottatt ved ADL Diagnostics og fikk vokse ved 18°C i agar PSA1, spesifikk for P. salmonis. De forskjellige isolater ble bekreftet med TaqMan® RT-PCR (A. Casanova, J. Obreque C., A.M. Sandino G. og J. Jashés.2001. tRNA-gener ble funnet i Piscirickettsia salmonis 16S-23S rDNA spacer region (ITS). FEMS Microbiology Letters. Vol.197: 19-22) (http://www3.appliedbiosystems.com/). Isolater ble merket som: Ps1: PM-10908; Ps": PM-10877; Ps3: PM10795; Ps4: PM-10766; Ps5: PM-10727 og Ps6: PM-10707.Minimum inhibitorisk konsentrasjon (MIC)MIC for de seks isolater ble bestemt ved anvendelse av en standardisert metode på National Comitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2005) basert på standard M49-P (2005), som involverer å utføre serielle fortynninger av produktet (100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,1; 1,5; 0,7; 0,35; 0,18; 0,09 ppm) for å bestemme den minimale konsentrasjon som inhiberer bakteriell vekst. Inokulum fra rene isolater i agar PSA ble opptatt for å oppnå en konsentrasjon av 0,5 McF, som ble utsådd med de forskjellige fortynninger av testforbindelser for å evaluere antibakteriell effekt i dyrkningsmikroplatene. Mikroplatene ble inkubert ved 18°C i 24 t. Deretter ble en avskrelling utført med hver fortynning på en agar plate PSA, som deretter ble inkubert i 10 dager for å observere vekst av P. salmonis.Resultater og diskusjonMIC for carvacrol (CAR1) nådde en verdi i området 3,7 til 7,4 ppm. For det bestemte tilfellet av CAR2 ble MIC oppnådd på 3,7 ppm i alle isolatene som ble testet, noe som indikerer at tymol ville forsterke den antibakterielle virkning av carvacrol alene (Tabell 1).Tabell 1.Minimum inhibitorisk konsentrasjon (MIC) av Carvacrol (CAR1) og Carvacrol Tymol (CAR1 CAR2) mot isolater av P. salmonis.Følgende konklusjoner kan trekkes fra dette eksperiment:1. Carvacrol inhiberer vekst av en populasjon av P. salmonis i et in vitro forsøk.2. Den estimerte MIC for carvacrol var mellom 3,7 og 7,4 ppm.3. Den estimerte MIC for carvacrol og tymol var ca.3,7 ppm, noe som indikerer at tymol forsterker den antibakterielle virkning. Eksempel 2 – effekten av Carvacrol og Thymol mot Piscirickettsia salmonis i regnbueørret under en vekstfaseFormålet med dette stadium er:1) Undersøke effektiviteten av Carvacrol og Thymol mot Piscirickettsia salmonis i regnbueørret (O. mykiss).2) Evaluere dersom pulsbehandlinger med Carvacrol og Thymol har en effekt på mortalitet i forbindelse med et P. salmonis utbrudd.Mellom november 2009 og desember 2009 ble et forsøk utført i Caniglia sjøfeltfasilitet av Mainstream (XI Region, Chile). Caniglia-stedet har 16 bur på 30 m x 30 x med et automatisk fôringssystem. Hvert bur inneholdt nær 50.000 fisk under growout-perioden. I Caniglia-forsøk ble regnbueørret (O. mykiss) anvendt i alle burene med fisk av vekt 1,280 g til 2,240 g.I forsøket ble fisk fôret et kommersielt fôr (EWOS Silva) som kontrollfôr. For hver behandling ble det samme kommersielle fôr anvendt som base men supplert med: i) en dosering av 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol pluss boost premix (BG ny) og ii) kun boost premix (BG). Boost premix som ble anvendt inneholdt immunstimulant, vitamin C og prebiotika (0,5% av formuleringen).Under forsøket ble et utbrudd av SRS (Salmonid Rickettsial Septikemi) observert etter 13. november. For å undersøke dets konsekvenser ble det vurdert en behandling med funksjonelle fôr (BG og BG+ny) og deretter sammenlignet med kontrollgruppen. Forsøket ble utført som en puls på 21 dagers fôring, startende den 26. november.Hver dag ble død fisk tatt fra burene og analysert direkte for mulige årsaker til mortalitet, og deretter registrert som kumulativ mortalitet av dette forskningssted. Ved starten og slutten av pulsen (26. november og 17. desember, respektivt), ble prøver av hjerne og nyre tatt fra 10 døende fisk pr. bur. Prøvene ble fiksert i etanol og vev ble analysert med qPCR av PCR-laboratoriet til EWOS Innovation Chile (X Region, Chile). Relative konsentrasjoner av DNA som foreligger under den eksponentielle fase av reaksjonen ble bestemt ved å plotte fluorescens mot syklusnummer på en logaritmisk skala, hvor syklus hvorved fluorescens fra en prøve krysset terskelverdien ble benevnt syklustersket (CT).Overlevelsesdata var tilgjengelig for alle bur og disse data ble først omdannet til en egnet form for overlevelsesanalyse ved å tilføye antallet overlevende individer ved slutten av monitoreringsperioden med en «overlevd» status (sensur). Alle mortaliteter ble gitt en «død» status. Deretter ble effektene av behandlinger på overlevelsesforhold modellert med et multinivå Cox proporsjonal risikomodell (kinship package of R). Antilogg av Cox-modellen av fikserte effektparametere kan tolkes som risikoforhold. Pålitelighetsintervallene av risikoforholdene ble beregnet med posterior simulering hvor man antar multivariat normal fordeling av parameterne med den estimerte felles varians-kovarians matriks og eksponentiering av posteriore fordelinger før man tar antilogaritmiske verdier. Bur-til-bur-varians ble ikke vurdert i denne simulering.ResultaterFôrkonsumpsjon mellom grupper av fisk var tilsvarende under hele perioden av forsøket og under pulsing av de funksjonelle fôr (0,7% - 0,88% kroppsvekt/dag). Figur 1 viser den observerte overlevelse av fisken ved forskjellige behandlinger. Hver kurve innen et subplot angir et bur.Figur 1 viser observert overlevelse for regnbueørret med et utbrudd av SRS gitt forskjellige behandlinger som beskrevet i eksempel 3. Hver kurve angir et bur.«Kontroll» er et kommersielt fôr (EWOS Silva), mens «BG» er en boost premix, og «BG ny» er boost premix og 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol.De estimerte risikoforhold i relasjon til kontrollfôr med tilnærmet 95% pålitelighetsintervaller er gitt i Tabell 2. Tabell 2Gjennomsnitt, median og 95% pålitelighetsintervall for estimerte sikkerhetsforhold (relative risiko for død) i relasjon til kontrollfôr.Dette er også vist grafisk i Figur 2 som viser de estimerte risikoforhold (relative risiko for død) i forhold til kontrollfôr (risiko tatt som 1 og markert med stiplet rød horisontal linje). Feilmarginer viser 95% pålitelighetsintervaller.Begge indikerer at BG ny behandling hadde redusert relativ risiko for mortalitet med ca.20%. Posterior sannsynlighet for redusert risiko for mortalitet var ca.90%. BG-behandling viste en tilsvarende sikkerhetsrisiko til kontrollfôr med en sannsynlighet for en reduserende effekt på ca.48%.Frekvensfordelingen av CT-verdi for hjernevev analysert med qPCR er presentert i figurer 3 og 4, ved initiering og ved slutten av pulsen. I starten ble det observert en tilsvarende fordeling av CT-verdier mellom behandlingene (Figur 3), med en modus i området 34 til 36. Disse resultater bekrefter utbruddet av SRS. Etter 21 dager med forskjellige behandlinger ble det observert at 95% av fisken fôret med BG+ny hadde CT-verdier >36, sammenlignet med 80% for kontroll (Figur 4). BG-fôret fisk hadde lavere CT-verdier enn de to andre behandlinger. En høyere CT-verdi betyr lavere nivåer av bakterier i vevet. Derfor, etter 21 behandlinger oppnådde fôret BG+ny høyere ytelse i å redusere P. salmonis sammenlignet med kontrollfôr og BG-fôr.Frekvensfordelingen av CT-verdien for nyrevev analysert ved qPCR er presentert i Figur 5 og Figur 6, ved initiering og ved slutten av pulsen. I starten ble det observert en tilsvarende fordeling av CT-verdier på ca.34 til 36 for alle behandlinger (Figur 5). Disse resultater bekreftet utbrudd av SRS. Etter 21 dager med de forskjellige behandlinger ble det observert at 45% av fisken fôret med BG+ny var negative for P. salmonis. Videre, 80% av fisken fôret med BG hadde CT-verdier >36 sammenlignet med 65% for kontrollen (Figur 6). Derfor, etter 21 dagers behandling oppnådde BG+ny-fôr høyere ytelse i å redusere P. salmonis sammenlignet med BG-fôr og kontrollfôr.Følgende konklusjoner kan oppnås fra dette forsøk:- Carvacrol og Thymol tilsatt i fôr (BG+ny) i en dosering av 30 ppm (15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol) viste seg å være mer effektiv i å redusere mortalitet av regnbueørret forårsaket av SRS-utbrudd enn BG-fôr og kontrollfôr.- Carvacrol og Thymol tilsatt i fôr (BG+ny) i en dosering av 30 ppm (15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol) oppnådde høyere ytelse i å redusere P. salmonis sammenlignet med kontrollfôr og BG-fôr.- En puls av Carvacrol og Thymol tilsatt i fôret i en dosering av 30 ppm (15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol) i 21 dager, kan redusere mortaliteten av regnbueørret etter et utbrudd av SRS.Definisjoner anvendt i søknadenPropyl-metyl-fenyl er en fenolforbindelse substituert med propyl og metyl på den aromatiske ringstruktur.Carvacrol er forbindelsen 5-isopropyl-2-metylfenol (C6H3CH3(OH)(C3H7)), og er en monoterpenoidfenol. Den har en karakteristisk skarp, varm lukt av oregano og en pizzalignende smak. Den er tilstede i den essensielle olje av Origanum vulgare, olje fra timian, og olje oppnådd fra karse og vill bergamott.Tymol er forbindelsen 2-isopropyl-5-metylfenol, og er en monoterpenoidfenolderivat av cymol, isomerisk med carvacrol, funnet i timianolje, og ekstrahert som en hvit krystallinsk substans med en god aromatisk lukt og sterke antiseptiske egenskaper.
Claims
Patentkrav1. Propyl-metyl-fenolforbindelse, eller sammensetning omfattende en propylmetyl-fenolforbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av Salmonid rickettsial septikemi (SRS) og/eller sykdommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping og regulering av Piscirickettsia salmonis.2. Forbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er isopropyl-metylfenol.3. Forbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er 2-isopropylmetyl-fenol.4. Forbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er 5-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.5. Forbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.6. Sammensetning i samsvar med krav 1, hvor sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.7. Sammensetning i samsvar med krav 1 eller 6, hvor sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol, og hvor konsentrasjonen er ca.3,7 mg/l, applisert til et vandig lokus, og ca.15 mg/kg som en komponent av et fôr.8. Sammensetning i samsvar med krav 1 eller 6, hvor sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol, hvor konsentrasjonen er ca.100 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.120 mg/kg som en komponent av et fôr.9. Sammensetning i samsvar med krav 1 eller 6, hvor sammensetningen er en fôrsammensetning omfattende ca.30 ppm Carvacrol og Thymol, for eksempel 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol.10. Sammensetning i samsvar med krav 6, hvor forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.11. Forbindelse eller sammensetning i samsvar med et av kravene 1-10, hvor nevnte fisk er en Salmonidae.12. Forbindelse eller sammensetning i samsvar med et av kravene 1-11, hvor nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).13. Anvendelse av en propyl-metyl-fenolforbindelse eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse for fremstilling av en farmasøytisk og/eller nutrasøytisk sammensetning for behandling og/eller profylakse av Salmonid rickettsial septikemi (SRS) og/eller sykdommer forårsaket av Piscirickettsia salmonis, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av Piscirickettsia salmonis.14. Fremgangsmåte for å drepe, bekjempe eller regulere Piscirickettsia salmonis, hvor fremgangsmåten omfatter å applisere en propyl-metyl-fenolforbindelse eller en sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse.
Drawings

Priority

26.03.2010 NO 20100454

Patent classes

IPC classesA23K 10/30A23K 20/111A23K 50/80A61K 36/00A61K 36/53A61K 31/05A61P 31/00A61P 31/04A61K 45/06CPC classesA23K 10/30A23K 20/111A23K 50/80A61K 36/00A61K 36/53A61K 31/05A61P 31/00A61P 31/04

Citations

JP 11130689 A (A)Antiviral and Antimicrobial Properties of Essential Oils, by Dominique Baudoux, aug 2000 ()WO 0069277 A1 (A1)Ching, CYY, 2008, «Improving aquaculture production through…», Feed Technology Update 3 (1), January 2008. ()Baricevic,D. & Bartol, T., 2002, «The biological/pharmacoligical activity of Origanum genus. In Part 5 Pharmacology 177-213, Taylor & Francis. ()WO 2007090714 A (A)JP 2207758 A (A)wo 2005035558 A2 (A2)Yiagnisis M et al.2009. “Effect of dietary oregano essential oil supplementation on combined infections by pathogenic bacteria-parasites (sea lice and copepods) in European sea bass Dicentrarchus labrax L”., 14th EAFP International Conference, Prague, September 14-19, 2009, Diseases of Fish and Shellfish. ()Rattaachaikunsopon P & Phumkhachorn P., 2010, “Assessment of synergistic efficacy of carvacrol and cymene against Edvardsiella tarda in vitro and in Tilapia (Oreochromis niloticus)”, Af.J.Microb. Vol 4 (5) p 420-425 ()WO 2004091307 A2 (A2)

Applicants, owners and inventors

Owners
Ewos Innovation AS
4335 DIRDAL NO (GJESDAL Municipality, Rogaland county)Org. number: 911501252Inventors
José Luis González Vecino
Hetlandsgt. 26 4013 STAVANGER NO (STAVANGER Municipality, Rogaland county)
Adel El-Mowafi
Osliveien 42 4308 SANDNES NO (SANDNES Municipality, Rogaland county)
José Miguel Troncoso Kirsten
Benavente 550, Piso 10A PUERTO MONTT CL
Nestor Javier González Foretic
Benavente 550, Piso 10A PUERTO MONTT CL
Jorge Eduardo Pino Marambio
Los Alpes 99 PUERTO VARAS, REGION DE LOS LAGOS CL

Agent

ACAPO ONSAGERS AS
ACAPO ONSAGERS AS

Org. number: 932214636

Name and address are automatically synchronized with the Brønnøysund Register Centre.

Open in The Brønnøysund Register Centre
Edvard Griegs vei 1 5059 BERGEN NO (BERGEN Municipality, Vestland county)
Org. number: 932214636
Reference: P15255NO01

Status history

Payment history

Oppositions and appeals

ProtestReceived: 28.11.2014 NIPO's case No.: 2014/00510Current status: Avgjort. Patentsaken endelig avgjort, behandling av protest avsluttes
RequestorHÅMSØ PATENTBYRÅ AS
HÅMSØ PATENTBYRÅ AS

Org. number: 918752900

Name and address are automatically synchronized with the Brønnøysund Register Centre.

Open in The Brønnøysund Register Centre
 Postboks 9 4068 STAVANGER NO
Requestor's agentHÅMSØ PATENTBYRÅ AS Postboks 9 4068 STAVANGER NO (STAVANGER Municipality, Rogaland county)
Org. number: 918752900Reference: Y30118NO00

Administrative limitation

No administrative limitation

Liens and licences

No liens or licenses registered

Gazette entries

No Gazette entries foundOnly events from 2024.03.04 and onwards are shown.