Key information

Title
Forbindelse og sammensetning for kontroll av infeksiøs lakseanemi (ILA)
Application number
20140949
Case type
PCT-based
Status
02.09.2024 Patent meddelt (B1)
Filed
30.07.2014
Divided from
20121253 (346522)
Priority
26.03.2010 NO 20100454
International application date
28.03.2011
International application number
PCT/NO2011/000106
Effective date
28.03.2011
Publicly available
27.09.2011
Next annual fee due
31.03.2027
Applicant
Ewos Innovation AS (NO)
Owner
Ewos Innovation AS (NO)
Inventor
José Luis González Vecino (NO) et al.
Agent
ACAPO ONSAGERS AS (NO)
Granted
02.09.2024
Patent number
348141
Expiry date
28.03.2031

Abstract and drawing

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content.
Det beskrives en propyl-metyl-fenolforbindelse, spesielt Thymol og/eller Carvacrol eller sammensetninger omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av infektiøs lakseanemi (ISA) og/eller sykdommer forårsaket av infektiøs lakseanemivirus, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av infektiøs lakseanemivirus.

Publications

B1A1
Checking availability of the latest published version...

Documents

 Expand Download files (40)
Date
 Date Doc. No. Process Case number In/Out Journal description To/from
 06.09.2024 19-01 Saksbehandling 20140949(348141) UT PT Registreringsbrev nasjonal patent (15) (PT20140949)
28.06.2024 18-01 Saksbehandling 20140949 UT PT Meddelelse om patent ACAPO AS
 19.03.2024 17-06 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2024-03-18 Response ACAPO AS
 19.03.2024 17-05 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2024-03-18 Amended description - marked-up version ACAPO AS
 19.03.2024 17-04 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2024-03-18 Amended description - clean version ACAPO AS
 19.03.2024 17-03 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2024-03-18 Amended claims - marked-up version ACAPO AS
 19.03.2024 17-02 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2024-03-18 Amended claims - clean version ACAPO AS
 19.03.2024 17-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 08.02.2024 16-01 Saksbehandling 20140949 UT Realitet patent ACAPO AS
 28.09.2023 15-09 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2023-09-28 Response ACAPO AS
 28.09.2023 15-08 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2023-09-28 Description - marked-up version ACAPO AS
 28.09.2023 15-07 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2023-09-28 Description - clean version ACAPO AS
 28.09.2023 15-06 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2023-09-28 Claims of main request - marked-up version ACAPO AS
 28.09.2023 15-05 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2023-09-28 Claims of main request - clean version ACAPO AS
 28.09.2023 15-04 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2023-09-28 Claims of auxiliary request - marked-up version ACAPO AS
 28.09.2023 15-03 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - 2023-09-28 Claims of auxiliary request - clean version ACAPO AS
 28.09.2023 15-02 Saksbehandling 20140949 INN D2 - JP2207758 ACAPO AS
 28.09.2023 15-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 17.07.2023 14-01 Saksbehandling 20140949 UT 20140949_1734809_PT 08 ACAPO AS
 31.10.2022 13-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 05.01.2021 12-04 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - response 050121 ACAPO AS
 05.01.2021 12-03 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - amended claims - 050121 ACAPO AS
 05.01.2021 12-02 Saksbehandling 20140949 INN P15255NO02 - amended claims - 050121 - with annotations ACAPO AS
 05.01.2021 12-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 17.11.2020 11-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 04.11.2020 10-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 03.11.2020 09-02 Saksbehandling 20140949 INN Granskningsrapport, 050520 ACAPO AS
 03.11.2020 09-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 05.05.2020 08-02 Saksbehandling 20140949 UT PT report 12:08:18
05.05.2020 08-01 Saksbehandling 20140949 UT Realitet patent ACAPO AS
 01.12.2014 06-01 Saksbehandling 20140949 UT PT Batch Påminnelse om ikke betalt årsavgift (3329)
13.08.2014 05-02 Saksbehandling 20140949 INN Krav Acapo AS
 13.08.2014 05-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (hoved dok) Acapo AS
 11.08.2014 04-01 Saksbehandling 20140949 UT PT Batch Varsel om betaling av første årsavgift (3317)
06.08.2014 03-02 Saksbehandling 20140949 INN Hovedbrev Acapo AS
 06.08.2014 03-01 Saksbehandling 20140949 INN Korrespondanse (hoved dok) Acapo AS
 04.08.2014 02-01 Saksbehandling 20140949 UT Formalia 1 Acapo AS
 30.07.2014 01-03 Saksbehandling 20140949 INN Beskrivelse
30.07.2014 01-02 Saksbehandling 20140949 INN figurer - 300714
30.07.2014 01-01 Saksbehandling 20140949 INN National Patent Application Form

Description, claims and drawings

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content. Description
Område for oppfinnelsenDen foreliggende oppfinnelse vedrører en propyl-metyl-fenol-forbindelse eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenol-forbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av infektiøs lakseanemi (ISA) og/eller sykdommer forårsaket av infektiøs lakseanemisk virus, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av infektiøs lakseanemivirus.Infektiøs lakseanemi, og infektiøs lakseanemivirus (ISAv)Infektiøs lakseanemi (ISA) er et dobbelttrådet RNA-virus tilhørende Ortomyksoviridae. Viruset har forårsaket alvorlig økonomisk effekt i mange lakseproduserende regioner, inkluderende Chile, Norge, Skottland, Færøyene, Canada og USA. Sykdommen resulterer i alvorlig anemi i atlantisk laks, påvirker det bloddannende vev inkluderende milt, nyre og likeledes lever og hjerte. Ørret og andre marine organismer kan være asymptomatiske bærere av sykdommen. Nivåer av mortalitet varierer sterkt, men økonomiske tap på opp til 90% har blitt registrert. Toppene på utbrudd forekommer generelt om våren og tidlig sommer med temperaturer rundt 10°C. ISA har forekommet i et temperaturområde av 3°C - 15°C. I 1997 ble ISA listet i European Union Directive 91/67EC og klassifisert som sykdom som en "List I disease".Smittsom (infektiøs) lakseanemi eller anemi (ISA) er en viral sykdom i atlantisk laks (Salmo salar) som påvirker fiskeoppdrett i Canada, Norge, Skottland og Chile, og forårsaker alvorlig tap av infiserte farmer.Som navnet medfører, forårsaker den alvorlig anemi i infisert fisk. I motsetning til pattedyr så har de røde blodceller i fisk DNA, og kan bli infisert med virus. Fisken utvikler bleke gjeller, og svømmer nær vannoverflaten og gisper etter luft. Imidlertid, sykdommen kan også utvikles uten at fisken viser noen ytre tegn på sykdom, og fisken kan opprettholde en normal appetitt, og deretter plutselig dø. Sykdommen kan utvikle seg langsomt gjennom et infisert anlegg, og i de verste tilfeller kan dødsraten nærme seg 100%. Post-mortem-undersøkelser av fisken har vist et spekter av årsaker til døden. Lever og milt kan være oppsvulmet, blokkert eller delvis allerede død. Sirkulasjonssystemet kan stoppe å fungere, og blodet kan være kontaminert med døde blodceller. Røde blodceller som fremdeles er til stede sprenges enkelt, og antallet umodne og skadete blodceller øker.Infektiøs lakseanemi synes å være mest likt influensavirus. Dets overføringsmodus og naturlige reservoarer for infektiøs lakseanemivirus er ikke fullt forstått. I tillegg til atlantisk laks, kan både sjøgående brun ørret (Salmo trutta) og regnbueørret (Oncorhynchus mykiss) infiseres, men de blir ikke syke, så det er tenkt mulig at disse arter kan virke som viktige bærere og reservoarer av viruset.Viruset kan overleve i sjøvann og, ikke overraskende, en hoved risikofaktor for mange infiserte oppdrettsanlegg er nærhet til et allerede infisert anlegg.I det siste har det blitt vist at sjølus, en liten krepsparasitt som angriper den beskyttende mukus, skjell og skinn i laksen viste seg å bære viruset passivt på dets overflate og dets fordøyelseskanal, men overføring av sykdommen med sjølus har ikke blitt påvist ennå.Det er derfor svært viktig å finne nye forbindelser og nye måter å behandle og hindre Piscirickettsia salmonis og ISAv-forårsakede sykdommer i fisk.WO 2004091307 og JP2207758 beskriver de anti inflammatoriske og betennelsesdempende egenskapene til ulike fenolforbindelser. Det er imidlertid ingen informasjon som tyder på at slike forbindelser kan brukes i behandling/ forebygging/ kontroll av infektiøs lakseanemi (ISA). Det objektive tekniske problem ifølge foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe nye effektive midler og fremgangsmåter for å drepe eller regulere Piscirickettsia salmonis og ISAv.Sammendrag av oppfinnelsenEt første aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en propyl-metyl-fenolforbindelse, eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenol-forbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av infektiøs lakseanemi (ISA) og/eller sykdommer forårsaket av infektiøs lakseanemisk virus, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller kontrollering av infektiøs lakseanemivirus.Foretrukne utførelser ifølge foreliggende oppfinnelse er gitt i underkravene 2-2, og vedrører én eller flere av følgende trekk:- nevnte forbindelse er isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.- sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.- konsentrasjonen (av aspekt 1) er ca.3,7 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca. 15 mg/kg som en komponent av et fôr.- konsentrasjonen (av aspekt 2) er ca.100 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.120 mg/kg som en komponent av et fôr.- sammensetningen er en fôrsammensetning og hvor mengden av Carvacrol og Thymol er ca.30 ppm eller mer av nevnte fôrsammensetning, for eksempel mengden av Carvacrol er ca.15 ppm og mengden av Thymol er ca.15 ppm.- forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.- nevnte fisk er en Salmonidae.- nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus). Et andre aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en anvendelse av en propylmetyl-fenol-forbindelse, eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse for fremstilling av en farmasøytisk og/eller nutrasøytisk sammensetning for behandling og/eller profylakse av infektiøs lakseanemi (ISA) og/eller sykdommer forårsaket av infektiøs lakseanemisk virus, og/eller for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av infektiøs lakseanemivirus.Foretrukne utførelser av dette aspekt av foreliggende oppfinnelse er gitt i underkravene 14-23, og vedrører én eller flere av følgende trekk:- nevnte forbindelse er isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-metyl-fenol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.- sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.- konsentrasjonen (av aspekt 1) er ca.3,7 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.15 mg/kg som en komponent i et fôr.- konsentrasjonen (av aspekt 2) er ca.100 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca. 120 mg/kg som en komponent av et fôr.- sammensetningen er en fôrsammensetning hvor mengden av Carvacrol og Thymol er ca.30 ppm eller mer av nevnte fôrsammensetning, for eksempel hvor mengden av Carvacrol er ca.15 ppm og mengden av Thymol er ca.15 ppm.- forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.- nevnte fisk er en Salmonidae.- nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).Et tredje aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for å drepe, bekjempe eller regulere infektiøs lakseanemivirus, hvor fremgangsmåten omfatter å applisere en propyl-metyl-fenol-forbindelse eller en sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenol-forbindelse.Foretrukne utførelser av tredje aspekt av foreliggende oppfinnelse er gitt i underkravene 25-35, og vedrører én eller flere av følgende trekk:- nevnte propyl-metyl-fenol-forbindelse appliseres til et lokus som skal beskyttes fra nevnte bakterier eller virus.- nevnte lokus er et vandig miljø og hvor propyl-metyl-fenol-forbindelsen appliseres direkte til det vandige lokus.- nevnte lokus inneholder fisk og som er mottakelige til infeksjoner forårsaket av Piscirickettsia salmonis eller infektiøs lakseanemisk virus, hvor propyl-metyl-fenolforbindelsen appliseres direkte til fisken, fortrinnsvis med topikal eller oral applisering.- propyl-metyl-fenol-forbindelsen appliseres til fisken som en komponent av fôret som mates til fisken.- nevnte forbindelse er isopropyl-metyl-fenol, fortrinnsvis 2-isopropyl-metyl-fenol. - nevnte forbindelse er 2-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.- nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.- sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.- forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.- nevnte fisk er en Salmonidae.- nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).Detaljert beskrivelse av oppfinnelsenUtførelser av oppfinnelsen vil nå bli beskrevet, ved hjelp av eksempler med referanse til følgende figurer, hvor:Figur 1 viser observert overlevelse av regnbueørret med et utbrudd av SRS gitt forskjellige behandlinger som beskrevet i eksempel 3. Hver kurve angir at bur. «Kontroll» er et kommersielt fôr (EWOS Silva), hvor «BG» er en boost premiks, og «BG ny» er boost premiks og 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol, dvs. et representativt eksempel på en «forbindelse i samsvar med oppfinnelsen».Figur 2 viser estimerte risikoforhold (relativ risiko for død) i relasjon til kontrollfôr (risiko tatt som 1 og markert med stiplet rød horisontal linje). Feilmarginer viser 95% pålitelighetsintervaller. «BG» er en boost premiks, og «BG ny» er boost premiks og 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol.Figur 3 viser CT-verdiene for P. salmonis i hjernevev ved initiering av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR.Figur 4 viser CT-verdiene for P. salmonis i hjernevev ved slutten av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR.Figur 5 viser CT-verdiene for P. salmonis i nyrevev ved initiering av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR.Figur 6 viser CT-verdiene for P. salmonis i nyrevev ved slutten av forsøket beskrevet i eksempel 3 oppnådd gjennom qPCR. Eksperimentell seksjonEksempel 1 - effekt av carvacrol på Piscirickettsia salmonisFormålet med dette forsøk er å evaluere effektiviteten av carvacrol, og en kombinasjon av carvacrol og tymol mot Piscirickettsia salmonis (P. salmonis) med in vitro bestemmelse av Minimum Inhibitorisk Konsentrasjon (MIC).Materialer og metoderFremstilling av testforbindelseneFremstilling av arbeidsløsninger av carvacrol og tymol ble utført av Laboratory of Ecological Chemistry, Faculty of Chemistry, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Carvacrol (Sigma Aldrich 98% standard kvalitet) ble fortynnet i destillert vann/etanol-løsning opp til 200 ppm (benevnt "CAR1"). Carvacrol tymol (Sigma Aldrich 98% standard kvalitet) 1:1 (volum:volum) ble fortynnet i DMSO/destillert vann ved 200 ppm (benevnt "CAR2"). Alle produkter, forrådsløsninger og arbeidsløsninger ble lagret under avkjøling (4°C) og ble håndtert under et laminært strømningskammer for å unngå kontaminering av produktene som skal evalueres.Antibakteriell effektivitetEvalueringen av MIC av de forskjellige løsninger av carvacrol og tymol mot P. salmonis ble utført ved ADL Diagnostics, Puerto Montt, Chile. Seks forskjellige isolater av P. salmonis ble oppnådd fra kliniske tilfeller mottatt ved ADL Diagnostics og fikk vokse ved 18°C i agar PSA1, spesifikk for P. salmonis. De forskjellige isolater ble bekreftet med TaqMan® RT-PCR (A. Casanova, J. Obreque C., A.M. Sandino G. og J. Jashés.2001. tRNA-gener ble funnet i Piscirickettsia salmonis 16S-23S rDNA spacer region (ITS). FEMS Microbiology Letters. Vol.197: 19-22) (http://www3.appliedbiosystems.com/). Isolater ble merket som: Ps1: PM-10908; Ps": PM-10877; Ps3: PM10795; Ps4: PM-10766; Ps5: PM-10727 og Ps6: PM-10707. Minimum inhibitorisk konsentrasjon (MIC)MIC for de seks isolater ble bestemt ved anvendelse av en standardisert metode på National Comitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2005) basert på standard M49-P (2005), som involverer å utføre serielle fortynninger av produktet (100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,1; 1,5; 0,7; 0,35; 0,18; 0,09 ppm) for å bestemme den minimale konsentrasjon som inhiberer bakteriell vekst.Inokulum fra rene isolater i agar PSA ble opptatt for å oppnå en konsentrasjon av 0,5 McF, som ble utsådd med de forskjellige fortynninger av testforbindelser for å evaluere antibakteriell effekt i dyrkningsmikroplatene. Mikroplatene ble inkubert ved 18°C i 24 t. Deretter ble en avskrelling utført med hver fortynning på en agar plate PSA, som deretter ble inkubert i 10 dager for å observere vekst av P. salmonis.Resultater og diskusjonMIC for carvacrol (CAR1) nådde en verdi i området 3,7 til 7,4 ppm. For det bestemte tilfellet av CAR2 ble MIC oppnådd på 3,7 ppm i alle isolatene som ble testet, noe som indikerer at tymol ville forsterke den antibakterielle virkning av carvacrol alene (Tabell 1).Tabell 1.Minimum inhibitorisk konsentrasjon (MIC) av Carvacrol (CAR1) og Carvacrol Tymol (CAR1 CAR2) mot isolater av P. salmonis.Følgende konklusjoner kan trekkes fra dette eksperiment:1. Carvacrol inhiberer vekst av en populasjon av P. salmonis i et in vitro forsøk.2. Den estimerte MIC for carvacrol var mellom 3,7 og 7,4 ppm.3. Den estimerte MIC for carvacrol og tymol var ca.3,7 ppm, noe som indikerer at tymol forsterker den antibakterielle virkning.Eksempel 2 – antiviral effekt av Carvacrol og Thymol mot ISAvISAv er et alvorlig problem for chilensk lakseindustri med en høy registrering av mortaliteter i de siste to år.Det objektive formål med forliggende forsøk er å undersøke den antivirale effektivitet av carvacrol og tymol mot ISAv.Materialer og metoderFremstilling av produkteneFremstilling av arbeidsløsninger av carvacrol ble utført av Laboratory of Ecological Chemistry, Faculty of Chemistry, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile.Carvacrol (Signa Aldrich 98% standard kvalitet) ble fortynnet i destillert vann/etanolløsning opp til 200 ppm (benevnt "CAR1"). Alle produkter, forrådsløsning og arbeidsløsninger ble lagret under kjøling (4°C) og ble håndtert under laminær strømningskammer for å unngå kontaminering av produktene som skal evalueres.Stamme av ISAvDet ble anvendt en stamme av ISAv oppnådd fra ADL Diagnostic (ADL-PM3205-ISAV-07), som ble isolert fra en nyre av atlantisk laks (ASK-1) innfestet med ISAv i Isla Lemuy, Chiloé, Chile. Det isolerte virus ble bekreftet, gjennom Indirekte immunfluorescens (IFAT) og RT-PCR. Utfordring med ISAvElleve fortynninger ble fremstilt med carvacrol (100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,1, 1,5, 0,7, 0,35, 0,18, 0,09 mg/l). Hver fortynning ble utfordret med ISAv i en konsentrasjon av 107.25TCID50 (median vevsdyrkningsinfektiv dosering; den mengde av et patogent middel som vil produsere patologisk forandring i 50% av cellekulturene som er inokulert), i løpet av 30, 60, 120 og 360 minutter). Deretter ble hver fortynning av carvacrol med ISAv inokulert i et monosjikt av ASK-1-celler (Atlantic salmon Kidney-1 celler, isolert og opprettholdt i ADL Diagnostic) og inkubert i 10 dager. Nærvær av ISAv i hvert sjikt av celler ble bestemt, gjennom IFAT (indirekte fluorescent antistofftest).ResultaterCarvacrol viste en effekt mot ISAv i høy fortynning (100 mg/l) testet in vitro, etter virusadsorpsjon (Tabell 2). Etter 60 minutter inhiberte carvacrol replikasjon av ISAv i alle replika.Tabell 2Fravær (-) eller nærvær (+) av ISAv i vev ASK-1 utfordret med viruset og behandlet med forskjellige doseringer av carvacrol (CAR 1)Følgende konklusjoner oppnås fra dette eksperiment:1. Carvacrol bevises å eliminere ISAv før adsorpsjon.2. Den estimerte fortynning hvor carvacrol eliminerer ISAv er 100 ppm, etter 60 minutters utfordring med viruset.Eksempel 3 – effekten av Carvacrol og Thymol mot Piscirickettsia salmonis i regnbueørret under en vekstfaseFormålet med dette stadium er:1) Undersøke effektiviteten av Carvacrol og Thymol mot Piscirickettsia salmonis i regnbueørret (O. mykiss).2) Evaluere dersom pulsbehandlinger med Carvacrol og Thymol har en effekt på mortalitet i forbindelse med et P. salmonis utbrudd.Mellom november 2009 og desember 2009 ble et forsøk utført i Caniglia sjøfeltfasilitet av Mainstream (XI Region, Chile). Caniglia-stedet har 16 bur på 30 m x 30 x med et automatisk fôringssystem. Hvert bur inneholdt nær 50.000 fisk under growout-perioden. I Caniglia-forsøk ble regnbueørret (O. mykiss) anvendt i alle burene med fisk av vekt 1,280 g til 2,240 g.I forsøket ble fisk fôret et kommersielt fôr (EWOS Silva) som kontrollfôr. For hver behandling ble det samme kommersielle fôr anvendt som base men supplert med: i) en dosering av 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol pluss boost premix (BG ny) og ii) kun boost premix (BG). Boost premix som ble anvendt inneholdt immunstimulant, vitamin C og prebiotika (0,5% av formuleringen).Under forsøket ble et utbrudd av SRS (Salmonid Rickettsial Septikemi) observert etter 13. november. For å undersøke dets konsekvenser ble det vurdert en behandling med funksjonelle fôr (BG og BG+ny) og deretter sammenlignet med kontrollgruppen. Forsøket ble utført som en puls på 21 dagers fôring, startende den 26. november.Hver dag ble død fisk tatt fra burene og analysert direkte for mulige årsaker til mortalitet, og deretter registrert som kumulativ mortalitet av dette forskningssted. Ved starten og slutten av pulsen (26. november og 17. desember, respektivt), ble prøver av hjerne og nyre tatt fra 10 døende fisk pr. bur. Prøvene ble fiksert i etanol og vev ble analysert med qPCR av PCR-laboratoriet til EWOS Innovation Chile (X Region, Chile). Relative konsentrasjoner av DNA som foreligger under den eksponentielle fase av reaksjonen ble bestemt ved å plotte fluorescens mot syklusnummer på en logaritmisk skala, hvor syklus hvorved fluorescens fra en prøve krysset terskelverdien ble benevnt syklustersket (CT).Overlevelsesdata var tilgjengelig for alle bur og disse data ble først omdannet til en egnet form for overlevelsesanalyse ved å tilføye antallet overlevende individer ved slutten av monitoreringsperioden med en «overlevd» status (sensur). Alle mortaliteter ble gitt en «død» status. Deretter ble effektene av behandlinger på overlevelsesforhold modellert med et multinivå Cox proporsjonal risikomodell (kinship package of R). Antilogg av Cox-modellen av fikserte effektparametere kan tolkes som risikoforhold. Pålitelighetsintervallene av risikoforholdene ble beregnet med posterior simulering hvor man antar multivariat normal fordeling av parameterne med den estimerte felles varians-kovarians matriks og eksponentiering av posteriore fordelinger før man tar antilogaritmiske verdier. Bur-til-bur-varians ble ikke vurdert i denne simulering.ResultaterFôrkonsumpsjon mellom grupper av fisk var tilsvarende under hele perioden av forsøket og under pulsing av de funksjonelle fôr (0,7% - 0,88% kroppsvekt/dag). Figur 1 viser den observerte overlevelse av fisken ved forskjellige behandlinger. Hver kurve innen et subplot angir et bur. Figur 1 viser observert overlevelse for regnbueørret med et utbrudd av SRS gitt forskjellige behandlinger som beskrevet i eksempel 3. Hver kurve angir et bur.«Kontroll» er et kommersielt fôr (EWOS Silva), mens «BG» er en boost premix, og «BG ny» er boost premix og 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol.De estimerte risikoforhold i relasjon til kontrollfôr med tilnærmet 95% pålitelighetsintervaller er gitt i Tabell 3.Tabell 3Gjennomsnitt, median og 95% pålitelighetsintervall for estimerte sikkerhetsforhold (relative risiko for død) i relasjon til kontrollfôr.Dette er også vist grafisk i Figur 2 som viser de estimerte risikoforhold (relative risiko for død) i forhold til kontrollfôr (risiko tatt som 1 og markert med stiplet rød horisontal linje). Feilmarginer viser 95% pålitelighetsintervaller.Begge indikerer at BG ny behandling hadde redusert relativ risiko for mortalitet med ca.20%. Posterior sannsynlighet for redusert risiko for mortalitet var ca.90%. BG-behandling viste en tilsvarende sikkerhetsrisiko til kontrollfôr med en sannsynlighet for en reduserende effekt på ca.48%.Frekvensfordelingen av CT-verdi for hjernevev analysert med qPCR er presentert i figurer 3 og 4, ved initiering og ved slutten av pulsen. I starten ble det observert en tilsvarende fordeling av CT-verdier mellom behandlingene (Figur 3), med en modus i området 34 til 36. Disse resultater bekrefter utbruddet av SRS. Etter 21 dager med forskjellige behandlinger ble det observert at 95% av fisken fôret med BG+ny hadde CT-verdier >36, sammenlignet med 80% for kontroll (Figur 4). BG-fôret fisk hadde lavere CT-verdier enn de to andre behandlinger. En høyere CT-verdi betyr lavere nivåer av bakterier i vevet. Derfor, etter 21 behandlinger oppnådde fôret BG+ny høyere ytelse i å redusere P. salmonis sammenlignet med kontrollfôr og BG-fôr.Frekvensfordelingen av CT-verdien for nyrevev analysert ved qPCR er presentert i Figur 5 og Figur 6, ved initiering og ved slutten av pulsen. I starten ble det observert en tilsvarende fordeling av CT-verdier på ca.34 til 36 for alle behandlinger (Figur 5). Disse resultater bekreftet utbrudd av SRS. Etter 21 dager med de forskjellige behandlinger ble det observert at 45% av fisken fôret med BG+ny var negative for P. salmonis. Videre, 80% av fisken fôret med BG hadde CT-verdier >36 sammenlignet med 65% for kontrollen (Figur 6). Derfor, etter 21 dagers behandling oppnådde BG+ny-fôr høyere ytelse i å redusere P. salmonis sammenlignet med BG-fôr og kontrollfôr.Følgende konklusjoner kan oppnås fra dette forsøk:- Carvacrol og Thymol tilsatt i fôr (BG+ny) i en dosering av 30 ppm (15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol) viste seg å være mer effektiv i å redusere mortalitet av regnbueørret forårsaket av SRS-utbrudd enn BG-fôr og kontrollfôr.- Carvacrol og Thymol tilsatt i fôr (BG+ny) i en dosering av 30 ppm (15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol) oppnådde høyere ytelse i å redusere P. salmonis sammenlignet med kontrollfôr og BG-fôr.- En puls av Carvacrol og Thymol tilsatt i fôret i en dosering av 30 ppm (15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol) i 21 dager, kan redusere mortaliteten av regnbueørret etter et utbrudd av SRS.Definisjoner anvendt i søknadenPropyl-metyl-fenyl er en fenolforbindelse substituert med propyl og metyl på den aromatiske ringstruktur.Carvacrol er forbindelsen 5-isopropyl-2-metylfenol (C6H3CH3(OH)(C3H7)), og er en monoterpenoidfenol. Den har en karakteristisk skarp, varm lukt av oregano og en pizzalignende smak. Den er tilstede i den essensielle olje av Origanum vulgare, olje fra timian, og olje oppnådd fra karse og vill bergamott.Tymol er forbindelsen 5-isopropyl-2-metylfenol, og er en monoterpenoidfenolderivat av cymol, isomerisk med carvacrol, funnet i timianolje, og ekstrahert som en hvit krystallinsk substans med en god aromatisk lukt og sterke antiseptiske egenskaper.
Claims
Patentkrav1. Propyl-metyl-fenolforbindelse, eller sammensetning inneholdende en propylmetyl-fenolforbindelse for anvendelse i behandling og/eller profylakse av infektiøs lakseanemi (ISA) og/eller sykdommer forårsaket av infektiøs lakseanemivirus, og/eller ved anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av infektiøs lakseanemivirus.2. Propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er isopropyl-metyl-fenol.3. Propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er 2-isopropyl-metyl-fenol.4. Propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er 5-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.5. Propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1, hvor nevnte forbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.6. Sammensetning inneholdende en propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1, hvor sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.7. Sammensetning inneholdende en propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1 eller 6, hvor sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol, og hvor konsentrasjonen er ca.3,7 mg/l, applisert til et vandig lokus, og ca.15 mg/kg som en komponent av et fôr.8. Sammensetning inneholdende en propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1 eller 6, hvor sammensetningen omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol, hvor konsentrasjonen er ca.100 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca. 120 mg/kg som en komponent av et fôr.9. Sammensetning inneholdende en propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 1 eller 6, hvor sammensetningen er en fôrsammensetning omfattende ca.30 ppm Carvacrol og Thymol, for eksempel 15 ppm Carvacrol og 15 ppm Thymol.10. Sammensetning inneholdende en propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med krav 6, hvor forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer foretrukket 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.11. Propyl-metyl-fenolforbindelse eller sammensetning inneholdende en propylmetyl-fenolforbindelse i samsvar med et av kravene 1-10, hvor nevnte fisk er en Salmonidae.12. Propyl-metyl-fenolforbindelse eller sammensetning inneholdende en propylmetyl-fenolforbindelse i samsvar med et av kravene 1-11, hvor nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).13. Anvendelse av en propyl-metyl-fenolforbindelse, eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse for fremstilling av en farmasøytisk og/eller nutrasøytisk sammensetning for behandling og/eller profylakse av infektiøs lakseanemi (ISA) og/eller sykdommer forårsaket av infektiøs lakseanemivirus, og/eler for anvendelse i dreping, bekjemping eller regulering av infektiøs lakseanemivirus.14. Anvendelse i samsvar med krav 13, hvor nevnte propyl-metyl-fenolforbindelse er isopropyl-metyl-fenol.15. Anvendelse i samsvar med krav 13, hvor nevnte propyl-metyl-fenolforbindelse er 2-isopropyl-metyl-fenol.16. Anvendelse i samsvar med krav 13, hvor nevnte propyl-metyl-fenolforbindelse er 5-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.17. Anvendelse i samsvar med krav 13, hvor nevnte propyl-metyl-fenolforbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.18. Anvendelse i samsvar med krav 13, hvor sammensetningen omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.19. Anvendelse i samsvar med krav 13 eller 18, hvor sammensetningen omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol, og hvor konsentrasjonen er ca.100 mg/l applisert til et vandig lokus, og ca.120 mg/kg som en komponent av et fôr.20. Anvendelse i samsvar med krav 19, hvor sammensetningen omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse er en fôrsammensetning og hvor mengden av Carvacrol og Thymol er ca.30 ppm eller mer av nevnte fôrsammensetning, for eksempel hvor mengden av Carvacrol er ca.15 ppm og mengden av Thymol er ca.15 ppm.21. Anvendelse i samsvar med krav 18, hvor forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, fortrinnsvis 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.22. Anvendelse eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med et av kravene 13-21, hvor nevnte fisk er en Salmonidae.23. Anvendelse eller sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse i samsvar med et av kravene 13-22, hvor nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coholaks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).24. Fremgangsmåte for å drepe, bekjempe eller regulere infektiøs lakseanemivirus, hvor fremgangsmåten omfatter å applisere en propyl-metyl-fenolforbindelse eller en sammensetning omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse.25. Fremgangsmåte i samsvar med krav 24, hvor nevnte propyl-metylfenolforbindelse appliseres til et lokus som skal beskyttes fra nevnte virus.26. Fremgangsmåte i samsvar med krav 25, hvor nevnte lokus er et vandig miljø og hvor nevnte propyl-metyl-fenolforbindelse appliseres direkte til det vandige lokus.27. Fremgangsmåte i samsvar med krav 25, hvor nevnte lokus inneholder fisk og hvor disse er mottakelige for infeksjoner forårsaket av infektiøs lakseanemivirus, hvor nevnte propyl-metyl-fenolforbindelse appliseres direkte til fisken, fortrinnsvis ved topikal eller oral applisering.28. Fremgangsmåte i samsvar med krav 25, hvor nevnte propyl-metyl-fenolforbindelse appliseres til fisken som en komponent av fôret som mates til fisken.29. Fremgangsmåte i samsvar med et av kravene 24-28, hvor nevnte propylmetyl-fenolforbindelse er isopropyl-metyl-fenol, fortrinnsvis 2-isopropyl-metyl-fenol.30. Fremgangsmåte i samsvar med et av kravene 24-29, hvor nevnte propylmetyl-fenolforbindelse er 5-isopropyl-2-metyl-fenol, dvs. Carvacrol.31. Fremgangsmåte i samsvar med et av kravene 24-30, hvor nevnte propylmetyl-fenolforbindelse er 2-isopropyl-5-metyl-fenol, dvs. Thymol.32. Fremgangsmåte i samsvar med krav 24, hvor sammensetningen omfattende en propyl-metyl-fenolforbindelse omfatter en blanding av Carvacrol og Thymol.33. Fremgangsmåte i samsvar med krav 32, hvor forholdet Carvacrol:Thymol er i området 1:3 til 3:1, mer fortrinnsvis 1:2 til 2:1, og mest foretrukket ca.1:1, basert på vekt.34. Fremgangsmåte i samsvar med et av kravene 24-33, hvor nevnte fisk er en Salmonidae.35. Fremgangsmåte i samsvar med krav 34, hvor nevnte fisk er valgt blant gruppen som består av atlantisk laks (Salmo salar), regnbueørret (Oncorhynchuss mykiss), Coho-laks (Oncorhynchus kisutch) og arktisk røye (Salvelinus alpinus).
Drawings

Priority

26.03.2010 NO 20100454

Patent classes

IPC classesA23K 10/30A23K 20/111A23K 50/80A61K 36/53A61K 36/537A61K 31/05A61P 31/00A61P 31/14A23K 1/18CPC classesA23K 10/30A23K 20/111A23K 50/80A61K 36/53A61K 36/537A61K 31/05A61P 31/00A61P 31/14

Citations

WO 2004091307 A2 (A2)JP 2207758 A (A)Kirkemo, Anne-Mette, 01.11.2008, «Infeksiøs lakseanemi er en naturlig og smittsom virussykdom, Veterinærinstituttet. ()Aspehaug,V. et al., «Characterization of the Infectious Salmon Anemia Virus Fusion Protein», J Virol. 2005 Oct; 79(19): 12544–12553. ()Reichling, J., Schnitzler, P., Suschke, U. and Saller, R. (2009) Essential oils of aromatic plants with antibacterial, antifungal, antiviral, and cytotoxic properties – an overview. Forsch Komplementmed 16, 79–90 ()

Applicants, owners and inventors

Owners
Ewos Innovation AS
4335 DIRDAL NO (GJESDAL Municipality, Rogaland county)Org. number: 911501252Inventors
José Luis González Vecino
Hetlandsgt. 26 4013 STAVANGER NO (STAVANGER Municipality, Rogaland county)
Adel El-Mowafi
Osliveien 42 4308 SANDNES NO (SANDNES Municipality, Rogaland county)
José Miguel Troncoso Kirsten
Benavente 550, Piso 10A PUERTO MONTT CL
Nestor Javier González Foretic
Benavente 550, Piso 10A PUERTO MONTT CL
Jorge Eduardo Pino Marambio
Los Alpes 99 PUERTO VARAS, REGION DE LOS LAGOS CL

Agent

ACAPO ONSAGERS AS
ACAPO ONSAGERS AS

Org. number: 932214636

Name and address are automatically synchronized with the Brønnøysund Register Centre.

Open in The Brønnøysund Register Centre
Edvard Griegs vei 1 5059 BERGEN NO (BERGEN Municipality, Vestland county)
Org. number: 932214636
Reference: P15255NO02

Status history

Payment history

Oppositions and appeals

No oppositions or appeals

Administrative limitation

No administrative limitation

Liens and licences

No liens or licenses registered

Gazette entries

No Gazette entries foundOnly events from 2024.03.04 and onwards are shown.