Key information

Title
Fish feed
Application number
20231264
Case type
PCT-based
Status
03.03.2025 Patent meddelt (B1)
Filed
21.11.2023
Divided from
20120303 (347704)
Priority
14.09.2009 NO 20093000
International application date
14.09.2010
International application number
PCT/NO2010/000336
Effective date
14.09.2010
Publicly available
21.05.2012
Next annual fee due
30.09.2027
Applicant
Aker Biomarine ASA (NO) et al.
Owner
Aker Biomarine ASA (NO) et al.
Inventor
Sigve Nordrum (NO) et al.
Agent
ACAPO ONSAGERS AS (NO)
Granted
03.03.2025
Patent number
348543
Expiry date
14.09.2030

Abstract and drawing

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content.
Det beskrives en fôrsammensetning som er egnet for å fôre fisk for å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom (HSMB) i fisk.

Publications

B1A1
Checking availability of the latest published version...

Documents

 Expand Download files (26)
Date
 Date Doc. No. Process Case number In/Out Journal description To/from
 06.03.2025 09-01 Saksbehandling 20231264(348543) UT PT Registreringsbrev nasjonal patent (15) (PT20231264)
06.01.2025 08-01 Saksbehandling 20231264 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 27.11.2024 07-01 Saksbehandling 20231264 UT Intention to grant ACAPO AS
 15.11.2024 06-04 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 - Trykningsklar renskrevet ACAPO AS
 15.11.2024 06-03 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 - Trykningsklar med merknader ACAPO AS
 15.11.2024 06-02 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 - Besvarelse ACAPO AS
 15.11.2024 06-01 Saksbehandling 20231264 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 16.08.2024 05-01 Saksbehandling 20231264 UT Substantive examination ACAPO AS
 20.06.2024 04-06 Saksbehandling 20231264 INN Response ACAPO AS
 20.06.2024 04-05 Saksbehandling 20231264 INN EP 2914124 B1 ACAPO AS
 20.06.2024 04-04 Saksbehandling 20231264 INN Decision of the Board of Appeal in EP 2914124 B1 ACAPO AS
 20.06.2024 04-03 Saksbehandling 20231264 INN Amended claims - marked-up version ACAPO AS
 20.06.2024 04-02 Saksbehandling 20231264 INN Amended claims - clean version ACAPO AS
 20.06.2024 04-01 Saksbehandling 20231264 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 24.01.2024 03-02 Saksbehandling 20231264 UT PT report 03:53:31
24.01.2024 03-01 Saksbehandling 20231264 UT Substantive examination ACAPO AS
 24.01.2024 03-01 Saksbehandling 20231264 INN Initial Publication with ISR (A1 09/2017)
24.01.2024 03-01 Saksbehandling 20231264 INN Initial Publication with ISR (A1 09/2017)
21.11.2023 02-03 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 Følgebrev til Styret ACAPO AS
 21.11.2023 02-02 Saksbehandling 20231264 INN Application form - page 9 ACAPO AS
 21.11.2023 02-01 Saksbehandling 20231264 INN Korrespondanse (Hovedbrev inn) ACAPO AS
 21.11.2023 01-05 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 Figurer 1-9 ACAPO AS
 21.11.2023 01-04 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 - Patent claims ACAPO AS
 21.11.2023 01-03 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 - Description ACAPO AS
 21.11.2023 01-02 Saksbehandling 20231264 INN P12061NO03 - Abstract ACAPO AS
 21.11.2023 01-01 Saksbehandling 20231264 INN Søknadsskjema Patent ACAPO AS

Description, claims and drawings

Disclaimer: This text has been machine-scanned and may contain errors – please refer to "Publications" for legally binding content. Description
OMRÅDE FOR OPPFINNELSENDen foreliggende oppfinnelse vedrører en fôrsammensetning for fisk omfattende konvensjonelle fôringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, en anvendelse av fôrsammensetningen og en fremgangsmåte for å fôre fisk som er mottagelige for en hjerte og skjelettmuskelbetennelsesinfeksjon.BAKGRUNN FOR OPPFINNELSENHjerte og skjelettmuskelbetennelsessykdom (HSMB) er en alvorlig smittsom sykdom i atlantisk laks med et høyt potensiale for overføring fra infiserte til frisk fisk. Siden første forekomst i 1999 har et økende antall utbrudd av sykdommen blitt registrert. Således, etter registrering av 68 utbrudd i 2003 og 54 i 2004 har antallet økt hvert år. I 2007 ble sykdommen diagnostisert ved 162 sjøvannsanlegg langs norskekysten og 144 i 2008 (Figur 1). Disse utbrudd forårsaker store tap for den norske lakseindustri siden anleggene som angripes får et stort antall fisk (mer enn 90 %) som lider av hjerteskader måneder etter sykdomshendelsen, noe som signifikant reduserer deres vekstpotensial. De fleste utbrudd rapporteres i januar, juni, juli og oktober, i fisk som er overført til sjøvann. Sykdommen har en stor økonomisk innvirkning for den norske lakseoppdrettsindustri, og et enkelt fiskeoppdrettsselskap rapporterte tap på opptil 10 millioner norske kroner per år på grunn av sykdommen 5 til 9 måneder senere. Imidlertid, der er indikasjoner på at HSMB også er relevant i andre arter enn de som tilhører salmonidene.Kliniske tegn på HSMB er typisk redusert appetitt og avvikende svømmeatferd. Der er ingen åpenbare ytre tegn, men ved obduksjon så fremkommer hjertet som blekt, mykt og slapt. HSMB produserer betennelse i hjertet som resulterer i død av hjerteceller. Disse skader fremkommer allerede i tidlige stadier av sykdommen og kan fortsette i flere måneder. Mortalitet øker med økende grad av hjertebetennelse.Inflammasjonen og celledød kan spres til andre organer og vev så som rød skjelettmuskel og lever, noe som forårsaker ytterligere alvorlige skader på disse organer.Den infeksiøse natur av HSMB har blitt dokumentert, idet sykdommen kan induseres i frisk fisk ved å injisere homogenisert vev fra fisk diagnostisert med HSMB, og ytter ligere overføres til frisk samhabiterende fisk (Kongtorp et al., 2004. Heart and skeletal muscle inflammation in Atlantic salmon, Salmo salar L.: a new infectious disease. Journal of Fish Disease: Vol 27(6), (p).351-358). HSMB forårsakes av et virus, som har blitt isolert (Eliassen et al., 2004. Isolation of heart and skeletal muscleinflammation virus (HSMIV) from Salmon. The 6th International Symposium on Viruses of Lower Vertebrates, Poster 19). Imidlertid, siden viruset ikke har blitt fullstendig karakterisert ennå så har vaksiner mot HSMB ikke blitt utviklet til nå. I tillegg, gjeldende utfordringsmodeller av sykdommen i laboratorier reproduserer kun histopatologien som er observert i feltet, ikke mortaliteten. Således, der er et klart behov for alternative behandlinger og fremgangsmåter for å redusere de negative effekter av denne alvorlige infeksjon. Et formål med foreliggende oppfinnelse er derfor å finne nye strategier og behandlinger som kan anvendes for positivt å påvirke sykdomsutviklingen i HSMB-infisert fisk, og likeledes i fisk som er mottakelige for infeksjon.Fra kjent teknologi kan nevnes EP 0322114 som beskriver behandling av Hitrasyken, og WO 2008153426 som beskriver behandling av inflammasjon.SAMMENDRAG AV OPPFINNELSENEt første aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fôrsammensetning for fisk for å hindre og/eller behandle hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom omfattende konvensjonelle fôringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, kjennetegnet ved at mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.I en foretrukket utførelse er mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, og mer fortrinnsvis er mer enn 24% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.I en for tiden foretrukket utførelse er innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) er mer enn ca.7% av de totale fettsyrer. Mer fortrinnsvis, innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) er mer enn ca.8% av de totale fettsyrer, mer fortrinnsvis 9%, mer foretrukket mer enn ca.10%, så som ca.10,2%. En fortrukket utførelse inneholder mengder av EPA som angitt i tabell 1.I en foretrukket utførelse er protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i fôret høyere enn 2, fortrinnsvis høyere enn 2,7. Fortrinnsvis, proteinene utgjør mer enn 50% (basert på vekt) og at lipidene utgjør mindre enn 20% (basert på vekt) av fôrsammensetningen. Mer fortrinnsvis, proteinene utgjør mer enn 52% (basert på vekt) og lipidene utgjør ca. 18% (basert på vekt) av fôrsammensetningen.En foretrukket utførelse vedrører en fôrsammensetning for laksefisk hvor sammensetningen har et redusert innhold av lipider og et øket innhold av proteiner sammen- lignet med kommersielle fôrsammensetninger anvendt for laksefisk i samme alder, størrelse og/eller utviklingstrinn.I en ytterligere utførelse er innholdet av n-6 fettsyrer er mindre enn 11% av de totale fettsyrer, fortrinnsvis i området 7-11%, mer foretrukket ca.10%.I en foretrukket utførelse er innholdet av n-3 fettsyrer er mer enn 23% og nivået av n-6 fettsyrer er mindre enn 11% av de totale fettsyrer.I en foretrukket utførelse er forholdet n-3 til n-6 fettsyrer er høyere enn 1,6, fortrinnsvis mer enn 2,2, mer foretrukket mellom 2,3 og 3,4.I en foretrukket utførelse er en andel av nevnte lipider er søramerikansk fiskeolje. Fortrinnsvis, fôrsammensetning inneholder mindre enn 0,5%, fortrinnsvis 0,2% basert på vekten av sammensetningen av tilsatt vegetabilsk olje, og at oljen fortrinnsvis tilsettes som et hydrolysat.I en foretrukket utførelse omfatter sammensetningen hydrolyserte fosfolipider, fortrinnsvis ca.0,1-0,2 vekt% av dietten, mer foretrukket mer enn 0,2 vekt% av sammensetningen. I en foretrukket utførelse omfatter sammensetning krillmel, fortrinnsvis ca.5 vekt%, mer foretrukket mer enn 5 vekt% av dietten.I en foretrukket utførelse omfatter fôret nukleotider og/eller manna-oligosakkarider og/eller anti-inflammatoriske forbindelser så som flavonoider.En foretrukket utførelse vedrører en fôrsammensetning, hvor nevnte proteiner utgjør mer enn 50% (basert på vekt) av sammensetningen, hvor lipidene utgjøre mindre enn 20% (basert på vekt), hvor mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer. Mer foretrukket, proteinet utgjør mer enn 52% (basert på vekt) av sammensetningen, og hvor lipidene utgjør mindre enn 18% (basert på vekt), fortrinnsvis 18% av dietten, hvor mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.En foretrukket utførelse vedrører en fôrsammensetning i hovedsak er som angitt for anti-HSMB diett 1 eller for anti-HSMB diett 2 i tabell 1 eller tabell 2.Et andre aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fôrsammensetningen som angitt over for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning og/eller ernæringssammensetning og/eller funksjonelt fôr for profylakse og/eller behandling av hjerteog skjelettmuskelbetennelsessykdom.En foretrukket utførelse vedrører å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerteog skjelettmuskelbetennelsessykdom i fisk.I en foretrukket utførelse er nevnte fisk en laksefisk, flatfisk eller en annen fiskeart egnet for akvakultur, fortrinnsvis artene atlantisk laks (Salmo salar).I en foretrukket utførelse er anvendelsen for effektiv gjenvinning etter hjerte- og skjelettmuskelinflammasjonsinfeksjon, og/eller reduksjon av risiko for reinfeksjon.Et tredje aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for å fôre fisk som er mottakelig for en hjerte- og skjelettmuskelbetennelsesinfeksjon, kjenne tegnet ved at en sammensetning som angitt over fôres til fisken i en periode før utfordring av en infeksjon, under infeksjonen og etter at fisken har blitt infisert.Fortrinnsvis fôres sammensetningen i en periode på minst 8 uker pre infeksjon, mer fortrinnsvis 10-16 uker, mest foretrukket 16-20 uker og 8-20 uker post infeksjon.Et fjerde aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fôrsammensetning for fisk omfattende konvensjonelle fôringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, kjennetegnet ved at mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.Fortrinnsvis, mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.Fortrinnsvis, mer enn 24% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.Mer foretrukket, innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) er mer enn ca.7% av de totale fettsyrer.Mer foretrukket, innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) er mer enn ca.8% av de totale fettsyrer, mer fortrinnsvis mer enn 9%, mer fortrinnsvis mer enn ca.10%, så som ca.10,2%.Foretrukket, protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i fôret er høyere enn 2, fortrinnsvis høyere enn 2,7, eller nevnte proteiner utgjør mer enn 50% (basert på vekt) og lipidene utgjøre mindre enn 20% (basert på vekt) av fôrsammensetningen, mer foretrukket at nevnte proteiner utgjør mer enn 52% (basert på vekt) og lipidene utgjøre ca.18% (basert på vekt) av fôrsammensetningen.I en foretrukket utførelse er innholdet av n-6 fettsyrer er mindre enn 11% av de totale fettsyrer, fortrinnsvis i området 7-11%, mer fortrinnsvis ca.10%. I en foretrukket utførelse er innholdet av n-3 fettsyrer er mer enn 23% og nivået av n-6 fettsyrer er mindre enn 11% av totale fettsyrer.I en foretrukket utførelse er forholdet av n-3 til n-6 fettsyrer er høyere enn 1,6, fortrinnsvis mer enn 2,2, mer fortrukket mellom 2,3 og 3,4.I en foretrukket utførelse er en andel av nevnte lipider er søramerikansk fiskeolje.Fortrinnsvis, innholdet av tilsatt vegetabilsk oljer er mindre enn 0,5%, fortrinnsvis 0,2% basert på vekt av sammensetningen, og at oljen fortrinnsvis tilsettes som et hydrolysat.Fortrinnsvis, sammensetningen omfatter hydrolyserte fosfolipider, fortrinnsvis ca. 0,1-0,2 vekt% av dietten, mer foretrukket mer enn 0,2 vekt% av dietten.Fortrinnsvis, sammensetningen omfatter krillmel, fortrinnsvis ca.5 vekt%, mer foretrukket mer enn 5 vekt% av dietten.Fortrinnsvis, fôret omfatter ytterligere nukleotider og/eller manna-oligosakkarider og/eller anti-inflammatoriske forbindelser så som flavonoider.Fortrinnsvis, proteinene utgjør mer enn 50% (basert på vekt) av sammensetningen, hvor lipidene utgjør mindre enn 20% (basert på vekt), hvor mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, og mer fortrinnsvis utgjør proteinene mer enn 52% (basert på vekt) av sammensetningen, og hvor lipidene utgjør mindre enn 18% (basert på vekt), fortrinnsvis 18% av dietten, hvor mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.I en foretrukket utførelse er sammensetningen i hovedsak som angitt for anti-HSMB diet 1 eller for anti-HSMB diet 2 i tabell 1 eller tabell 2. Et femte aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fôrsammensetning for fisk omfattende konvensjonelle fôringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, kjennetegnet ved at at protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i fôret er høyere enn 2, fortrinnsvis høyere enn 2,7 for å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom i fisk.Fortrinnsvis, protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i fôret er høyere enn 2,7.Fortrinnsvis, proteinet utgjør mer enn 50% (basert på vekt) av dietten, fortrinnsvis mer enn 52% og at lipidene utgjør mindre enn 20% (basert på vekt), fortrinnsvis 28% av dietten.Fortrinnsvis, mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, fortrinnsvis mer enn 23%, mer fortrinnsvis 24%.Fortrinnsvis, sammensetningen omfatter mer enn 23% n-3 fettsyrer og mindre enn 11% n-6 FA av de totale fettsyrer.Fortrinnsvis, innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 er mer enn 7% av de totale fettsyrer, fortrinnsvis mer enn 9%, mer fortrinnsvis 10,2%.Det skal anerkjennes at egenskaper ifølge oppfinnelsen beskrevet i ovennevnte kan kombineres i enhver kombinasjon uten å avvike fra oppfinnelsens ramme.BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN.Utførelser av oppfinnelsen vil nå bli beskrevet, ved hjelp av eksempler med referanser til de medfølgende figurer, hvor:Figur 2 viser modellert kumulativ sannsynlighet av myokardisk score mellom fôr ved 10, 12, 14 og 16 uker. Grafen viser sannsynlighet for at myokardisk score er lik eller mindre enn det som avleses på x aksen. Figur 3 viser modell koeffisienten (± 95 % konfidensintervaller) av myokardisk scoremodell sammenlignet mellom fôringer ved 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring. Dette betyr at dersom 95 % konfidensintervaller ikke overlapper de røde stiplete linjer som angir koeffisienten for kontrolldietten for en bestemt uke, så kan forskjellen vurderes som signifikant ved 5 % nivå. Videre, dersom fôrene sammenlignes over underplottene, kan uker som ikke har 95 % konfidensintervaller som krysser null linjen (ikke trukket) vurderes signifikant forskjellige fra 10 uker.Figur 4 viser modellerte kumulative sannsynligheter for epikardscore for hvert for ved 10, 12, 14 og 16 uker. Figurene gir sannsynligheten for at epikardisk score er lik eller lavere enn det som avleses på x aksen. Selv om forskjellene ikke var signifikante mellom de forskjellige dietter på epikardscore, så er der en klar trend at epikardscore er forbedret ved fôring med anti-HSMB1 eller 2.Figur 5 viser modellkoeffisientene (± 95 % konfidensintervaller) av den epikardiske scoremodell sammenlignbar mellom for ved 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring. Dette betyr at dersom 95 % troverdighetsintervallet ikke overlapper den røde stiplete linje som angir koeffisienten for kontrolldietten for en bestemt uke, så kan forskjellen vurderes som signifikant ved 5 % nivå. Videre, dersom kontrollfôrene sammenlignes over underplott, kan uker som ikke har 95 % konfidensintervaller som krysser null linjen (ikke trukket) vurderes signifikant forskjellig fra 10 uker.Figur 6 viser de modulerte kumulative sannsynligheter for leverscore mellom fôringer innen prøvetakingsukene. Grafen viser sannsynligheten for at score er lik eller mindre enn det som avleses på x aksen.Figur 7 viser modellkoeffisienter (± 95 % konfidensintervaller) av leverscore modell ved å sammenligne mellom fôr ved 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring. Dette betyr at dersom 95 % konfidensintervall ikke overlapper den røde stiplete linje som angir koeffisienten for kontrolldietten for en bestemt uke, så kan forskjellen vurderes signifikant ved 5 % nivå. Videre, dersom kontrollfôrene sammenlignes over underplottene, kan uker som ikke har 95 % konfidensintervaller som krysser nulllinjen (ikke trukket) vurderes signifikant forskjellig fra 10 uker.Figur 8 viser midlet vektøkning og 95 % konfidensintervall under 8 ukers fôringsperiode pre utfordring.Figur 9 viser nivået av EPA i hjertevev av atlantisk laks 8, 10, 12 g 16 uker etter utfordring.EKSPERIMENTELL SEKSJONEksperiment.Dietteffekten av HSMB ble testet i et fôringseksperiment med infisert atlantisk laks (Salmo salar). Laksesmolt anvendt for eksperimenter var alle fôret med den samme kommersielle diett i en periode på 10 uker under akklimatiseringsperioden. All fisken var i god tilstand og viste god og hurtig tilpasning til sjøvann.Fôringseksperiment:Forsøket besto av to faser. Under den første del ble det utført en 8 ukers periode pre utfordring, som ble utført ved en fôringsforsøksfasilitet. Etter denne periode ble fisken overført til en sykdomsutfordringsfasilitet og fisken ble akklimatisert i 2 uker. Etter denne periode omfattet den andre del av studiet en utfordring, fôring postutfordring og varte i 16 uker (det vil si 16 uker postutfordring).Totalt 945 atlantiske laks Salmo salar, pit-merket, med en gjennomsnittlig utgangsvekst på 10 g, sjøvannstilpasset ble fordelt i 9 tanker (1,0 x 1,0 m, 50 cm dybde; 500 liter volum) ved fôringsforsøksfasiliteten. Tre dietter ble vilkårlig allokert blant de 9 tanker (3 tanker per diett) og fôret til fisken i en periode på 8 uker. Mengden fôr som ble tilbudt under 8 ukers perioden var basert på målt eller estimert biomasse i tankene. Det daglige fôringsforhold som ble tilbudt varierte mellom 0,8-1,1 % fiskekroppsvekt per dag. Forsøksfôrene som ble gitt ble justert gjennom forsøket for å komplisere for fiskevekst. Fisken ble holdt i sjøvann ved omgivende temperatur og saltholdighet og diurnal fotoperiode, 24:0 (lys (L): mørk (D)). Vanntemperatur og saltholdighet ble målt hver dag i en representativ tank.Etter 8 ukers perioden ble fisken veid og lengdemålt, pit-merke ble registrert og overført til sykdomsutfordringsfasiliteten. Straks den nådde utfordringsfasiliteten ble fisken allokert til 18 tanker (2 laboratorier x 9 tanker, det vil si 6 tanker per diett) hvor den samme dietthistorie som under tidligere 8 uker ble beholdt. Fisken fikk akklimatisere seg til tankene ved utfordringsfasiliteten i 2 uker og deretter utfordret med HSMB. Fisken ble anestetisert før utfordring til HSMB-virus. HSMB-virus ble isolert fra syk fisk under et klinisk utbrudd av HSMB. All fisk ble utfordret med intramuskulær injeksjon (0,1 ml på hver side nær den laterale linje) av virus samlet fra celledyrkningssupernatant av HSMB-virus. Den generelle tilstand til fisken ble registrert daglig og enhver mortalitet ble summert på daglig basis (ingen mortalitet var forventet fra utfordringen). Alle andre mortaliteter, som skyldes andre forhold, som forekom under forsøksforløpet, ble registrert.Dietter:Fisk ble enten fôret med en kontrolldiett eller de to forskjellige eksperimentdietter anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 i samsvar med oppfinnelsen. Pelletstørrelsen av alle dietter var 3,5 mm. Diettene omfattet konvensjonelle fôringredienser som vanligvis finnes i fiskefôr så som proteiner, lipider, karbohydrater, vitaminer, mineraler.Sammensetningene av diettene var som følger (tabell 1):Tabell 1: Fuktighet-, protein-, lipid-, askeinnhold (alle vektprosent av diett) og likeledes fettsyrer (FA-sammensetning av totale fettsyrer) og n-3/n-6- fettsyreforhold av diettene anvendt i foringseksperimentet.*Lipider ble bestemt med metoden til folk, proteiner ble estimert fra elementær N (anvendt faktor 6,25).Tabell 2: Lipidklasser (%) i diettene foret under foringseksperimentet.Prøvetaking:Det ble tatt prøver av fisken i jevne intervaller etter 8, 10, 12, 14 og 16 uker, og histologiske prøver av hjertemuskel og lever ble analysert med hensyn til histopatologiske forandringer som beskrevet nedenfor. Totalt ble 360 fisk analysert frå fôringseksperimentet.Ytterligere behandling og analyser av prøvene:Histopatologien av hjerte og lever ble utført av en profesjonell veterinærtjeneste. Prøvene ble fiksert i 10 % nøytral fosfatbufret formalin. Formalinfikserte prøver ble separert for histologisk undersøkelse med standard parafinboksteknikker og farget med hematooksylin og eosin (H & E).Analyserte parametere:1. Hjerteinflammasjon: De histologiske forandringer har blitt evaluert på basis av en forutbestemt kategorisering av forandringer i hjertet. Fokus var på kardisk inflammasjon:Endotelforandringer i grenselinjen mellom det kompakte sjikt og det spongioøse sjikt i hjertet var viktige parametere i karakteriseringen.I tidlige faser var svelling og proliferasjon viktig, etterfulgt av infiltrering med mononukleære inflammatoriske celler-Infiltrering av inflammatoriske celler i det kompakte sjikt, fokalt eller diffust i utseende-infiltrering av inflammatoriske celler i det spongiøse sjikt, fokalt eller diffust i utseende ledsaget av degenerering og nekrose av myocytter, og svelling av de endoteliale celler som belegger de spongiøse moyfibre.Score var tilgjengelig fra 8, 10, 12, 14 og 16 uker postutfordring. Score fra 8 uker ble utelatt fra analysen siden kun et total på 5 fisk ble undersøkt (2 fra en diett og 3 fra en annen). Histologiske forandringer i epikard og myokard ble rangert i samsvar med en ikke- kontinuerlig score gradert fra 0 til 4 (0 indikerer ingen patologi, normalt vev; 4 indikerer intens inflammasjon). En beskrivelse av hver av scorene for epikard og myokard er inkludert i tabell 3.Tabell 3: Inflammasjonsscore for epikard og myokard av HSMB infisert Atlantisk laks.1. Leverinflammasjon:Lever histopatologi ble studert med forandringer relatert til mikro- og makro vesikulær steatose. Dette er karakterisert med varierende grader av vakuole- dannelse i cytoplasma i hepatocyttene. Gradering av score fulgte en ikke- kontinuerlig score fra 0 til 5, hvor 5 er det score som indikerer den høyeste grad av steatose i lever (fettlever). En beskrivelse av hver av graderings scorene er som følger.Score 0: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 10 % av hepatocyttene og inkluderende mindre enn 25 % av området for de individuelle hepatocytter.Score 1: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 25 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 25 % av området for de individuelle hepatocytter.Score 2: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 50 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 50 % av området for de individuelle hepatocytter.Score 3: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 75 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 75 % av området for de individuelle hepatocytter. Score 4: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 90 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 80 % av området for de individuelle hepatocytter.Score 5: Individuell dannelse av vakuoler i cytoplasma, involverende mindre enn 90 % av hepatocyttene, og inkluderende mindre enn 80 % av området for de individuelle hepatocytter.Statistiske analyser:All preparering av data- og simuleringsutgangsanalyser ble utført med "R language" (R: A Language and Environment for Statistical Computing, R Development Core Team, R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria, 2009, ISBN 3-900051-07-0, http://www.R-project.org). Individuelle vektøkningsdata ble analysert ved anvendelse av en lineær blandet-effekter modell (multinivåmodell) tilpasset mellom responsen og prediktor ved å tillate at skjæringspunktene kan variere fra tank til tank for å ta hensyn til tanknivå korrelasjoner og variabilitet. Modellen var en blandet-effekter lineær modell estimert med en lmerfunksjon i lme4-pakken.Behandlingsestimatene ble basert på posterior-simulering (n=2500) med 95 % konfidensintervaller som absolutt og proporsjonal til referansenivået (kontrolldiett).Histopatologiske score ble analysert ved anvendelse av multinivå-ordnet kategorisk logistisk revisjon på grunn av at dataene er multinominale. Modellen var skrevet i (BUGS language (Lunn, D.J., Thomas, A., Best, N., and Spiegelhalter, D. (2000) WinBUGS - a Bayesian modelling framework; concepts, structure, and extensibility. Statistics and Computing, 10:325-337) og tilpasset med JAGS (JAGS= Just anotherGibbs Sampler, Plummer, M. (2009) JAGS Version 1,03manual, http://wwwfis.iarc.fr/-martyn/software/jags/).Vage ikke-informative uniforme priorer [0,100] ble gitt for variansparameterne, og vage ikke-informative normale priorer (0,1,0E+4) for alle andre parametere. 25000 ”innkjørings”-simuleringer ble anvendt for å adaptere Markov Chain Monte Carlo (MCMC) påfølgende 2500 kjøringer som ble anvendt for interferens. Tre rekker ble kjørt i parallell, det vil si det var et total på 7500 simuleringer for interferens. Disse ble uttynnet slik at kun hver tiende simulering ble lagret for å redusere størrelsen av lagrete objekter og for å redusere effektene av autokorrelasjon. I sum, posterior tetthet er basert på 750 trekk fra den posteriore sannsynlighetsfordeling. Konvergens av MCMC-simuleringen ble vurdert med den såkalte Gelman-Rubin konvergens-diagnostikk (Gelman, A-and Rubin, D.B. (1992) Inference from iterative simulation using multiple sequences, Statistical Science, 7, 457-511).Resultater og konklusjon:Resultatene fra fôringseksperimentene viser at det er mulig å redusere påvirkningen av HSMB-sykdom gjennom dietten. Ved å anvende spesifikke diettformuleringer er det mulig å redusere både hjerteskade og leversteatose under sykdomsutbrudd.Hovedforandringene som er observert mellom diettgruppene var i myokardium, mens det ikke var klare forskjeller mellom diettene observert i epikardium.Med hensyn til myokardium, ved 10 uker postutfordring kunne ingen signifikante forskjeller i myokardiske score mellom diettene observeres siden 95 % konfidens- intervaller krysset den stiplete linje (figur 3a). Etter hvert som sykdommen utviklet seg syntes det som om scorene ble mer alvorlige for kontrollfôret ved 14 og 16 uker sammenlignet med 10 og 12 uker (negative koeffisienter for kontrollfôr i fig 3). Ved 12 uker postutfordring startet myokardisk å vise en trend mot forskjeller mellom dietter og 99 % av fisken fôret med diett anti- HSMB 1 hadde myokardiske score lik eller lavere enn 1, og for diettkontroll og anti- HSMB 2 rundt ca 96 % av fisken hadde score lik eller lavere enn 1 (figur 2b); de statistiske analyser viste at diett anti- HSMB 1 hadde høyere koeffisienter resulterende i bedre (lavere score) enn kontrollfôret ved uke 12, imidlertid kan det på dette tidspunkt kun vurderes som en trend siden 95 % koeffisientintervaller krysset svakt den stiplete linje (figur 3b). Ved uke 14 post utfordring hadde 62 % av fisken fôret med kontrolldiett myokardiske score lik eller lavere enn 1, sammenlignet med 86 % med diett anti- HSMB 2 og 96 % med diett anti- HSMB 1 (figur 2c). Ved uke 16 postutfordring, hadde 94 % av fisken fôret med diett anti- HSMB 1 myokardiske score lik eller mindre enn 1 sammenlignet med 85 % og 51 % på dietter anti- HSMB 2 og kontroll, respektivt (figur 2d). Forskjellene mellom dietter anti- HSMB 1 og kontroll ved 14 og 16 uker var statistisk signifikant siden høyere koeffisienter resulterer i signifikant bedre (lavere) myokardiske score observert med fôr anti- HSMB 1 sammenlignet til kontrollfôr (figur 3c). Tilsvarende positive effekter, men mye mildere og mindre sikre, ble observert med fôr anti-HSMB 2, imidlertid ikke statistisk signifikant (figur 3d). Med hensyn til epikardium, ved 10 uker postutfordring for alle fôr er 91- 92 % av de epikardiske score lik eller lavere enn 1, og ca 40 % av scorene var 0 for alle fôr (figur 4a). Ved 12 uker post- utfordring hadde fôret anti- HSMB 2 noe lavere sannsynlighet (81 %) av fisken hadde epikardiske score lik eller lavere enn 1 sammenlignet med 90 % for diett-kontroll og 92 % for diett anti- HSMB 1, selv om disse forskjeller ikke var signifikante (figur 4b). Ved uke 14 postutfordring var der en trend for fôr anti- HSMB 1 med en høyere sannsynlighet på 85 % til å ha epikardiske score lik eller lavere enn 1 sammenlignet med 69 % og 63 % sannsynlighet for diettene anti- HSMB 2 og kontroll, respektivt (figur 4). Ved uke 16 postutfordring fremkom det at diettene anti- HSMB 1 og anti- HSMB 2 hadde høyere sannsynligheter (90 % og 85 %, respektivt) av epikardiske score lik eller lavere enn 1 enn kontrollfôr (74 %). Selv om dette ikke kan kreves som signifikant, fremkommer en klar trend for fôr anti- HSMB 1 i å forbedre den patologiske status til fisken (figur 4d).Således, klare effekter på diettbehandlinger på den inflammatoriske status av fisken ble observert fra 12 uker og utover (figur 3-4), hvor spesielt dietten anti-HSMB 1 resulterte i en redusert inflammasjon på hjertet som indikert med høyere sannsynlig- het på å ha lave histopatologiske score sammenlignet med kontrolldietten. Enda mer markante forskjeller ble observert senere i fôringseksperimentet etter 14 og 16 uker av fôring med anti- HSMB dietter 1 og 2 sammenlignet med kontrollgruppen. Dette betyr at fisk fôret med anti- HSMB diett 1 hadde signifikant mindre skade sammen- lignet med kontrolldietten.Resultatene viser overraskende og klart potensiale for disse diettsammensetninger i modulering og behandling av HSMB- sykdom i Atlantisk laks.Fisk som lider av HSMB- sykdom har blitt beskrevet å ha forandringer i leveren. Således, leveren er gulaktig, viser et øket fettinnhold (vanligvis kjent som hepatisk steatose) og noen ganger har nekrotiske foki blitt observert hvor cellene er vakuolert og pyknotiske. Fôring med nye diettsammensetninger til HSMB-infisert Atlantisk laks overraskende påvirket den patologiske status av leveren (figurer 6-7).Ved 10 uker postutfordring hadde fisk fôret med dietter anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 klart høyere sannsynlighet for å ha lavere score (det vil si score mindre eller lik 1) (79 % og 72 % respektivt) sammenlignet til 16 % for kontrolldiett fisken (figur 6a). Koeffisientene for fôringer med anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 var signifikant bedre (lavere score - mindre steatose) ved 10 uker (figur 6a). Ved 14 uker postutfordring hadde fôr anti-HSMB 1 også høyere sannsynlighet (74 %) for å ha lavere score (det vil si indikerende en lavere grad av hepatisk steatose) sammenlignet med 40 % for fôr anti-HSMB 2 og til 23 % for kontrollfôr. Disse forskjeller var signifikant lavere for diett anti-HSMB 1, mens en trend fremkom for diett anti-HSMB 2 sammenlignet med kontroll (figur 7c).Således, klare effekter av anti- HSMB 1 dietter på leverstatus av fisken ble observert ved 10 og 14 uker (figur 6-7), hvor spesielt dietten anti-HSMB 1 resulterte i en redusert hepatisk steatose indikert med høyere sannsynlighet for å ha lave histopatologiske score sammenlignet med kontrolldietten. Disse effekter ble spesielt observert ved 10 og 14 uker postutfordring.I tillegg, klare signifikante forskjeller i vektøkning ble observert mellom dietter preutfordring (figur 8). Fisk vokste 89,82 g, 109,90 g og 107,28 g respektivt for diettkontroller, anti-HSMB 1 og anti-HSMB 2 (det vil si 23 % og 20 % mer enn kontrolldietten sammenlignet med anti-HMSI-diettene) etter 8 ukers foringsperiode før utfordring.De(n) eksakte mekanisme(r) bak denne overraskende effekt i å redusere hjerteinflammasjon i HSMB-infisert fisk med de nye diettsammensetninger i samsvar med foreliggende oppfinnelse er ikke klare enda. Et høyt innhold av n-3 fettsyrer, spesielt av fettsyren eikosapentaensyre (EPA 20:5n-3) er fordelaktig. Videre, et redusert innhold av lipider kombinert med et øket innhold av protein, sammenlignet med konvensjonelle fôrsammensetninger anvendt for vekst av de samme arter, syntes å være fordelaktig for modulering av HMSI-sykdommer.Figur 9 viser at nivået av fettsyren eikosapentaensyre (EPA 20:5n-3) akkumulerer i hjertevev, og uten å være bundet av mekanisme antas det at dette økte nivå av EPO på rett sted i fiskekroppen, dvs. i hjertevevet, er gunstig for HSMB-infisert fisk.Ytterligere, i en foretrukket utførelse i samsvar med foreliggende oppfinnelse anvendes søramerikansk fiskeolje som inneholder omtrent dobbelt så mye EPA som Nordisk Atlantisk fiskeolje for å øke innhold av EPA i anti-HSMB diettene.Videre, en reduksjon av innhold av n-6 fettsyrer, som typisk finnes i vegetabilske oljer, syntes å være nyttig i modulering av HSMB-sykdommen. Resultatet indikerer også at et redusert n-3/n-6-forhold slik at dette er i området 2,3 - 3,4 kan være fordelaktig.Lever til HSMB- infisert fisk påvirkes av sykdommen som beskrevet over. Dette kan ha en effekt på lipidfordøyelighet i fisken. I en foretrukket utførelse av foreliggende oppfinnelse tilsettes vegetabilske oljer til diettene i en hydrolysert form. Det syntes også fordelaktig å inkludere hydrolyserte fosforlipider til dietten.Det kan også være nyttig å tilføye krillmel og/eller krillolje til dietten. Fortrinnsvis, dietten kan videre omfatte nukleotider, antiinflammatoriske forbindelser og/eller mannaoligosakkarider (MOS).Det antas at fôrsammensetningen i samsvar med foreliggende oppfinnelse også er relevant for andre teleostarter enn salmonider som kan påvirkes av HSMB.Det skal innses at egenskapene av foreliggende oppfinnelse som beskrevet i foregående kan modifiseres uten å avvike fra rammen av oppfinnelsen.Definisjoner av termer og forkortelser:«FA» er forkortelsen som anvendes for ”fettsyrer”«n-3 fettsyrerer» en familie umettete fettsyrer som har som felles en final karbon- karbon dobbeltbinding i n-3 posisjon, som er den tredje binding fra metylenden av fettsyren. Disse fettsyrer er også kjent som omega 3 fettsyrer.«n-6 fettsyrer» er en familie umettete fettsyrer som har som felles en final karbon- karbon dobbeltbinding i n-6 posisjon som er den sjette binding fra metylenden av fettsyren. Disse fettsyrer er også kjent som omega 6 fettsyrer.Med termen «n-3/n-6-forhold» menes forholdet mellom fettsyrer tilhørende n-3-familien og de som tilhører n-6-familien i sammensetningen eller dietten.«Protein/lipid-forhold» angir forholdet mellom proteiner og lipider i sammensetningen eller dietten (hver av dem relatert til vekten av dietten).«HSMB» er forkortelsen som anvendes for ”hjerte og skjelettmuskel inflammasjons- sykdom”.Termen ”konvensjonelle foringredienser” refererer til ingredienser som vanligvis er en del av et fiskefôr så som proteiner, lipider, karbohydrater, vitaminer, mineraler, etc. Ingrediensene kan være avledet fra marine, vegetabilske, animalske biprodukter, og/eller av enhver annen relevant kilde og kan anvendes i enhver egnet kombinasjon.Termen ”nukleotider” refererer til molekyler som omfatter en nitrogenbase (purineller pyrimidinbase), et femkarbonsukker
Claims
P A T E N T K R A V1. Fôrsammensetning for fisk for anvendelse til å hindre og/eller behandle hjerte- og skjelett-muskelbetennelsessykdom omfattende konvensjonelle fôringredienser så som proteiner, lipider, vitaminer, karbohydrater og mineraler, k a r a k t e r i s e r t v e d at mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.2. Fôrsammensetning i samsvar med krav 1, k a r a k t e r i s e r t v e d at fortrinnsvis mer enn 23% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, mer enn 24% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer, og mer fortrinnsvis at innholdet av eikosapentaensyre 20:5 n-3 (EPA) er mer enn ca.7% av de totale fettsyrer.3. Fôrsammensetning i samsvar med et av de foregående krav,k a r a k t e r i s e r t v e d at protein:lipid-forholdet (vekt/vekt) i fôret er høyere enn 2, fortrinnsvis høyere enn 2,7.4. Fôrsammensetning i samsvar med et av de foregående krav,k a r a k t e r i s e r t v e d at innholdet av n-6 fettsyrer er mindre enn 11% av de totale fettsyrer, fortrinnsvis i området 7-11%, mer foretrukket ca.10%.5. Fôrsammensetning i samsvar med et av de foregående krav,k a r a k t e r i s e r t v e d at innholdet av n-3 fettsyrer er mer enn 23% og nivået av n-6 fettsyrer er mindre enn 11% av de totale fettsyrer.6. Fôrsammensetning i samsvar med et av de foregående krav,k a r a k t e r i s e r t v e d at fôret ytterligere omfatter nukleotider og/eller mannaoligosakkarider og/eller anti-inflammatoriske forbindelser så som flavonoider.7. Fôrsammensetning i samsvar med et av de foregående krav,k a r a k t e r i s e r t v e d at nevnte proteiner utgjør mer enn 50% (basert på vekt) av sammensetningen, hvor lipidene utgjøre mindre enn 20% (basert på vekt), hvor mer enn 20% av de totale fettsyrer er n-3 fettsyrer.8. Anvendelse av fôrsammensetningen i samsvar med et av de foregående krav 1-7 for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning og/eller ernæringssammen setning og/eller funksjonelt fôr for profylakse og/eller behandling av hjerte- og skjelett-muskelbetennelsessykdom.9. Anvendelse av fôrsammensetningen i samsvar med krav 8, for å hindre eller redusere symptomer relatert til hjerte- og skjelettmuskelbetennelsessykdom i fisk.10. Anvendelse i samsvar med krav 8, hvor nevnte fisk er en laksefisk, flatfisk eller en annen fiskeart egnet for akvakultur, fortrinnsvis artene atlantisk laks (Salmo salar).11. Anvendelse i samsvar med krav 8, for effektiv gjenvinning etter hjerte- og skjelettmuskelinflammasjonsinfeksjon, og/eller reduksjon av risiko for reinfeksjon.12. Anvendelse av fôrsammensetningen i samsvar med et av de foregående krav 1-7 for å fôre fisk som er mottakelig for en hjerte- og skjelett¬muskelbetennelsesinfeksjon, hvor nevnte sammensetning fôres til fisken i en periode før utfordring av en infeksjon, under infeksjonen og etter at fisken har blitt infisert.13. Anvendelse i samsvar med krav 12, hvor sammensetningen fôres i en periode på minst 8 uker pre infeksjon, mer fortrinnsvis 10-16 uker, mest foretrukket 16-20 uker og 8-20 uker post infeksjon.
Drawings

Priority

14.09.2009 NO 20093000

Patent classes

IPC classesA23K 10/22A23K 20/00A23K 20/147A23K 20/158A23K 20/163A23K 20/174A23K 50/00A23K 50/80CPC classesA23K 10/22A23K 20/00A23K 20/147A23K 20/158A23K 20/163A23K 20/174A23K 50/00A23K 50/80Y02A 40/818

Citations

EP 0322114 A2 (A2)WO 2008153426 A1 (A1)Biomar fôrkatalog, august 2009. Optimalisert fôr til settefisk ()A.M. PEDERSEN,» Olje fra raudåte…», Masteroppgave i biologi, Universitetet i Tromsø, november 2007. ()B.RUYTER ET AL., «Essential fatty acids in Atlantic salmon:...", Aquaculture Nutrition, vol. 6 (2) 2000, pages 119-127. ()

Applicants, owners and inventors

Owners
Aker Biomarine ASA
Postboks 1423 Vika 0115 OSLO NO (OSLO Municipality, Oslo county)Org. number: 913915062
Chemoforma Ltd
Rheinstrasse 28-32 4302 AUGST CH
Ewos Innovation AS
4335 DIRDAL NO (GJESDAL Municipality, Rogaland county)Org. number: 911501252Inventors
Sigve Nordrum
Åssletta 3 1341 SLEPENDEN NO (BÆRUM Municipality, Akershus county)
Dr. José Luis González Vecino
Staselinveien 9 4326 SANDNES NO (SANDNES Municipality, Rogaland county)
Simon Wadsworth
c/o Ewos Innovation AS 4335 DIRDAL NO (GJESDAL Municipality, Rogaland county)

Agent

ACAPO ONSAGERS AS
ACAPO ONSAGERS AS

Org. number: 932214636

Name and address are automatically synchronized with the Brønnøysund Register Centre.

Open in The Brønnøysund Register Centre
Edvard Griegs vei 1 5059 BERGEN NO (BERGEN Municipality, Vestland county)
Org. number: 932214636
Reference: P12061NO03

Status history

Payment history

Oppositions and appeals

No oppositions or appeals

Administrative limitation

No administrative limitation

Liens and licences

No liens or licenses registered

Gazette entries

No Gazette entries foundOnly events from 2024.03.04 and onwards are shown.